硫化氢在内毒素血症大鼠动脉反应性改变中的作用及其与一氧化氮的关系

发布时间：2020-07-02 21:46

【摘要】：目的 血管反应性异常是内毒素血症时重要的病理生理改变之一，主要表现为体循环压力的下降和早期肺循环压力的升高，甚至肺动脉高压（PAH）。正常情况下，由血管内皮细胞固有型一氧化氮合酶（cNOS）催化生成的一氧化氮（NO）是调节血管紧张性的主要物质；内毒素血症时，诱生型一氧化氮合酶（iNOS）大量表达，使NO生成增多,可对体循环与肺循环造成不同影响。目前认为，NO及其氧化产物的过量生成是导致血管内皮细胞损伤和血管反应性异常的重要原因。 硫化氢（H2S）是一种小分子量气体，是继NO、CO之后新近发现的另一种气体信号分子，生理状态下可由胱硫醚-α-裂解酶（CSE）等催化体内半胱氨酸（cysteine）降解产生。其生物学作用尚未完全明了，在发病学中的意义研究更少。已有实验表明，正常情况下内源性H2S可与NO协同舒张血管和消化道平滑肌；内毒素休克（ES）时，大鼠主、肺动脉等多种动脉组织产H2S的能力明显升高。提示，H2S可能参与内毒素血症时大鼠主、肺动脉反应性的调节，且这一作用的发挥或许与NO有关。本实验旨在从离体水平观察内毒素血症时H2S对主动脉、肺动脉血管反应性的调节作用及其与NO的关系，以深入探讨内毒素血症时体循环和肺循环血管反应性变化的发生机制。 WP=4 方法 静脉注射脂多糖（LPS）复制大鼠内毒素血症模型，随机分为2组：正常对照组：静脉注射等量生理盐水（0.5 ml/kg）；LPS组：静脉注射LPS（5 mg/kg，10 mg/ml）。动物分别于给药2和6小时后腹腔内注射25%乌拉坦（5 ml/kg）麻醉，颈部正中切口分离颈动脉，静脉注射肝素（1 250 U/kg）抗凝后经颈动脉放血处死动物并留取血液标本。联合取出大鼠心肺，分离并制备离体胸主动脉血管环(TARs) 和肺动脉血管环（PARs）。将血管环固定于血管张力测定装置的浴槽内，用10-6 mol/L苯肾上腺素（PE）预收缩TARs和PARs至反应平台，然后测定：（1）各组TARs和PARs对硫氢化钠（NaSH，H2S供体）的累积舒张反应曲线；（2）用非选择性NO合酶抑制剂L-硝基精氨酸（L-NNA）、iNOS抑制剂氨基胍（AG）或NO的供体硝普钠（SNP）分别预孵育血管环20 min后，再测定各组TARs和PARs对NaSH舒张反应的变化。 取前述留取的血液标本，离心后取上清制备血浆，采用吸光度法于酶标仪（670 nm）检测H2S浓度。 另取健康大鼠胸主动脉和肺动脉，置于含有不同处理因素和青、链霉素的RPMI 1640组织培养基中，在通有5% CO2气体的37℃孵箱中孵育，随机分为4组（1）正常（溶剂）对照组：组织培养基和生理盐水溶剂孵育；（2）LPS组：培养基和LPS（终浓度5 μg/ml）孵育；（3）LPS+NaSH组：培养基、LPS（终浓度5 μg/ml）和不同浓度的NaSH（终浓度50、100、150 μmol/L）孵育；（4）NaSH组：培养基和NaSH（终浓度为150 μmol/L）孵育。孵育6小时后取出，常规制备HE光镜标本，观察各组胸主动脉和肺动脉的结构改变。 WP=5 统计学分析在胸主动脉和肺动脉两部分中各自比较。数据用均数±标准差（ ±s）表示，给药前后行配对t检验，组间差异用单因素方差分析（one way ANOVA）,有显著差异者进一步用Newman-Kuels q检验进行两两比较，以P 0.05为有统计学意义。 结果 内毒素血症大鼠TARs和PARs血管反应性的变化 正常对照组TARs对PE（10-6 mol/L）产生收缩反应，注入LPS 2小时和6小时后，TARs对PE的收缩反应与正常对照组相比明显降低（P 0.01），其中LPS 6小时组TARs的收缩反应比LPS 2小时组TARs的收缩反应降低更明显（P 0.01）。正常对照组TARs可对NaSH（200-350 μmol/L）产生剂量依赖性的舒张反应；LPS可使TARs对NaSH的最大舒张反应百分比明显升高（P 0.01），其中LPS 6小时组TARs比LPS 2小时组TARs升高更明显（P 0.01）。正常对照组PARs对PE产生收缩反应，注入LPS对各组PARs的收缩反应无明显影响（P 0.05）；正常对照组PARs对NaSH（100-350 μmol/L）产生剂量依赖的舒张反应，注入LPS后，LPS 2小时组PARs对NaSH的最大舒张反应百分比较正常对照组和LPS 6小时组PARs降低（P 0.05），而正常对照组PARs与LPS 6小时组相比无明显差别（P 0.05）。 NO在内毒素血症时TARs和PARs血管反应性变化中的作用。 NO在TARs和PARs对PE收缩反应变化中的作用 正常对照组TARs和PARs用AG（10-4 mol/L）和SNP（10-8 mol/L）预孵育后对PE的收缩反应变化不明显（P 0.05）。 WP=6 LPS 2小时组和LPS 6小时组的TARs和PARs用AG预孵育20 min后，对PE的收缩反应与孵育前相比明显升高（P 0.05或 P 0.01）。用SNP预孵育20 min后，LPS 2小时和LPS 6小时组TARs对PE的收缩反应比孵育前降低（P 0.01）；LPS 2小时组和LPS 6小时组PARs对PE的收缩反应比孵育前也降低，但无统计学意义（P 0.05）。L-NNA（10-4 mol/L）预孵育20 min后，各组TARs和PARs对PE的收缩反应较孵育前均显著增加（P 0.01）。 NO在TARs和PARs对NaSH舒张反应中的作用 正常对照组TARs用L-NNA（10-4 mol/L）预孵育20 min后，对NaSH的累积舒张反应曲线右移，最大舒张百分比与SNP预孵育时相比降低（P 0.05），而与孵育前相比无明显变化（P 0.05）；用AG（10-4 mol/L）预孵育后，与孵育前相
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2738726