TPO基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血功能重建的研究

发布时间：2020-07-03 19:13

【摘要】： 目的:造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT )是治疗恶性血液病、放化疗敏感的实体肿瘤以及急性放射病的重要手段。HSCT后造血重建缓慢,出现骨髓造血抑制期,白细胞、血小板少,感染和出血成为移植后的主要并发症之一,也是移植相关死亡的主要原因。目前认为HSCT后造血重建缓慢与基质损伤、缺乏合适的促进造血干/祖细胞增殖、分化的微环境有关。自G-CSF、GM-CSF应用于临床以来,明显地缩短了中性粒细胞缺乏时间,降低了感染的发生率。然而目前针对因血小板减少引起的急性出血,临床上主要依赖输注血小板悬液,但长期输注血小板有可能带来许多严重副作用,存在价格昂贵、反复输注产生血小板抗体导致无效性血小板输注等诸多问题。已证实,TPO是调控血小板生成的首要、特异性因子。因此,本课题以微环境的主要成分——骨髓基质细胞(BMSCs)为靶细胞,用脂质体将含小鼠TPOcDNA编码区的真核表达质粒转染BMSCs,通过观察转染TPO基因的BMSCs移植对放射损伤后小鼠在血小板恢复及造血重建方面的作用,探索基质细胞介导的造血生长因子基因治疗促进造血功能重建的可行性。 方法:体外部分:参照Dexter法分离培养小鼠BMSCs,免疫细胞化学法及细胞化学染色法鉴定小鼠BMSCs,脂质体介导含小鼠TPOcDNA编码区的真核表达质粒转染BMSCs,RT-PCR、免疫细胞化学法及Western blot法检测目的基因转染BMSCs后TPO在mRNA和蛋白水平的表达,以转染空载体(pcDNA3.1)质粒和未转染的BMSCs作为对照。体内部分:采用单次剂量6.5Gy的60Co-γ射线照射受体鼠,照射后动物随机分四组,单纯骨髓细胞移植组(A组)、未转染BMSCs+骨髓细胞移植组(B组)、转染TPO基因的BMSCs+骨髓细胞移植组(C组)、转染空载体的BMSCs+骨髓细胞移植组(D组),分别于照射后24小时内给予骨髓细胞、BMSCs移植,在不同时相点进行血细胞计数,取股骨骨髓细胞行瑞氏染色,肝、脾组织行HE染色,进行组织病理学检测。 结果:实验主要结果如下: 1.小鼠BMSCs的培养及鉴定BMSCs形态呈异质性,原代细胞呈集落生长,传代后则均匀生长,免疫细胞化学法显示小鼠抗小鼠波形蛋白阳性,大鼠抗小鼠DC单
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346
【图文】：

251: DNA marker； 2: 未转染组；3:空载体转染组；4: TPO基因转染组图1-1 小鼠骨髓基质细胞TPOmRNA的表达表1-1 不同实验组小鼠骨髓基质细胞中TPOmRNA的表达(ˉx ± s n=8)组别 TPOmRNA（NII）未转染组 0.172±0.007空载体转染组 0.182±0.014TPO基因转染组 0.622±0.011▲#与未转染组相比：▲P<0.01；与空载体转染组相比：#P<0

251: DNA marker； 2: 未转染组；3:空载体转染组；4: TPO基因转染组图1-1 小鼠骨髓基质细胞TPOmRNA的表达表1-1 不同实验组小鼠骨髓基质细胞中TPOmRNA的表达(ˉx ± s n=8)组别 TPOmRNA（NII）未转染组 0.172±0.007空载体转染组 0.182±0.014TPO基因转染组 0.622±0.011▲#与未转染组相比：▲P<0.01；与空载体转染组相比：#P<0

【参考文献】

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1 史曦凯,王吉刚,梁后杰,张翼军,陈洁平,夏顺中,罗高兴;腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰的骨髓基质细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究[J];重庆医学;2002年09期

本文编号：2740059