重组人生长激素对肠道缺血再灌损伤大鼠PMN功能和凋亡的影响

发布时间：2020-07-04 00:58

【摘要】： 目的 (1)观察肠道缺血再灌注(GIR)损伤对中性粒细胞(PMNs)功能和凋亡影响，GIR损伤后血浆脂质过氧化物(LPO)、乳酸和PMNs在肠组织中扣押的变化；(2)观察重组人生长激素(rhGH)对GIR损伤大鼠PMN功能和凋亡的影响及其凋亡相关基因的表达与调控；(3)rhGH在GIR损伤后炎性损害中的调理作用。方法 60只大鼠随机分为假手术对照组(Sham组)、肠缺血再灌注组(GIR组)、rhGH治疗组(rhGH组)，其中rhGH组按不同用药时间又分为再灌注后3小时用药组(POR 3h组)和再灌注后12小时用药组(POR 12h组)。利用经典的肠系膜前(上)动脉夹闭技术，复制大鼠全肠道缺血再灌注损伤模型，缺血时间为60min。GIR组和rhGH组分别在再灌注后24h、48h、72h取血，分离出PMNs和血浆，按样本要求进行规范处理和保存。采用电镜、免疫组化等先进技术，分别观察血液PMN的凋亡、Fas凋亡基因的表达、呼吸爆发(NADPH氧化酶活性)和吞噬功能，并检测血浆中LPO和乳酸含量及肠道组织中MPO活性。结果一、电镜和光镜观察：GIR组PMN体积变小，细胞质浓缩，细胞核变小，染色质浓缩并凝结成块，出现凋亡小体，呈典型的凋亡细胞表现。光镜观察结果和电镜一致。二、细胞凋亡的原位检测：GIR损伤大鼠血液PMN凋亡率较Sham组显著增加(P均＜0.01)，再灌注后72h凋亡率最高。rhGH治疗可明显降低第一军医大学中文摘要 GIR损伤大鼠血液PMN凋亡率，至再灌注后48h、72h出现显著统计学差别沪值分别0.05、0.01)，但仍明显高于Sham组(P均0.01)。两用药组比较，POR 3h组PMN凋亡率下降较POR 1 Zh组似乎更明显，但无显著统计学差别(P均0.05)。PMN的凋亡率与Fas基因表达、血浆LPO含量、呼吸爆发功能密切相关(;=0.9170，P0.001;:=0.5380，P0.001;;=0.3110， P0 .05)。三、FaS的免疫组化染色:GIR损伤大鼠血液中FaS阳性表达的PMNS(%) 较Sham组显著增加(P均0.01)，再灌注后48h Fas阳性表达的PMNs最多。 rhGH治疗可明显减少G工损伤大鼠血液中Fas阳性表达的PMNs，至再灌注后48h、72h出现显著统计学差别(P值分别0D5、0.01)，但仍显著高于 Sham组(P均0.01)。两用药组比较，POR 3h组Fas阳性表达的PMNs减少较POR 12h组似乎更明显，但无显著统计学差别(P均0 .05)。Fas阳性表达的PMNs与血浆LPO含量密切相关(r一0.5470，尸0.001)。四、呼吸爆发检测:GIR损伤大鼠血液PMN的NADPH酶活性(吸光度差值)较Sham组显著增加(P均0，01)，再灌注后24h NADPH酶活性最高。:hGH治疗可明显降低GIR损伤大鼠血液中PMN的NADPH酶活性，除外POR12h组24h，其余各时相点均有显著差异(P0.05或尸0.01)，但 rhGH组24h和POR 1 Zh组48h较Sham组仍有显著差异(P均0.01)。两用药组比较，POR3h组PMN的NADPH酶活性降低较为显著，再灌注后24h 和48h有显著差异(尸0.05)。PMN的呼吸爆发和吞噬率、吞噬指数密切相关(r=0 .6 120，P0.001;r=0.5880，P0.001)。丘、吞噬率和吞噬指数:GIR损伤大鼠血液PMN的吞噬率较Sham组增力11，再灌注后24h，48h有显著差异(P均0.01)。;hGH治疗可明显降低 GIR损伤大鼠血液PMN的吞噬率，除外POR 1 Zh组24h和rhGH用药72h，其余各时相点均有显著差异(P0.05或尸0.01)，但rhGH组24h较sham 组仍有显著差异沪均0.01)。两用药组比较，POR3h组pMN的吞噬率下降较POR 12h组似乎更明显，但无显著统计学差别护均0 .05)。GIR损伤大鼠血液PMN的吞噬指数较Shaln组增加，再灌注后24h， 48h有显著差异(P均0.01)。rhGH治疗可明显降低G破损伤大鼠血液PMN的吞噬指数，一2— 第一军医大学中文摘要除外thGH用药72h，其余各时相点均有显著差异(P0.05或p0.01)，但由GH组24h较sham组仍有显著差异(P均0 .01)。两用药组间比较，POR 3h组PMN的吞噬指数下降较POR 12h组似乎更明显，但无显著统计学差别(P均0 .05)。六、血浆脂质过氧化物(LPO)含量检测:GD又损伤大鼠血浆LPO含量较Sham组显著增加(P均0 .01)，再灌注后48h LPo含量最高。rhGH治疗可明显降低G刃R损伤大鼠血浆LPO含量，除外POR 12h组24h，其余各时相点均有显著差异(P0.05)，但thGH组48h和72h较Sham组仍有显著差异(p0.0一或p0.05)。两用药组比较，POR 3h组血浆LPO含量降低较 POR 12h组似乎更明显，但无显著统计学差别(P均0.05)。七、血浆乳酸浓度检测:GIR损伤大鼠血浆乳酸浓度较Sham组显著增加(P均0.01)，再灌注后48h乳酸浓度最高。thGH治疗可明显降低G工损伤大鼠血浆乳酸浓度，除外POR 12h组24h，其余各时相点均有显著差异伊0.05或p0.01)，但PoR 12h组24h较shaln组仍有显著差异(P0.05)。两用药组比较，显示POR3h组血浆乳酸浓度降低较POR 12h组似乎更明显，但无显著统计学差别(P均0 .05)。八、肠组织髓过氧化物酶(MPo)活性检测:GIR损伤大鼠肠组织MPO 活性较Shaln组显著增加(P均0 .01)，再灌注后72h MPO活性最高。rhGH 治疗可降低GIR损伤大鼠肠组织MPO活性，但无显著统计学差别(P均 0 .05)，各时相点与sharn组比较仍有
【学位授予单位】：中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363;R965

【参考文献】