HBV转基因小鼠孕前期及孕期应用乙肝疫苗的实验研究

发布时间：2020-07-05 02:36

【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染是母婴传播的一种主要途径，也是造成人群中大量HBV携带者的原因之一。研究表明，母血中的表面抗原(HBsAg)浓度与宫内感染发生率成正相关，即母血中的HBsAg浓度越高，宫内感染发生率越高。因而降低母血中的HBsAg浓度对于降低宫内感染发生率有重要作用。本研究运用免疫学、病理学和毒理学的技术方法，分析HBV转基因(HBVTg)鼠血清中HBsAg浓度在应用乙肝疫苗前后的变化，以及应用乙肝疫苗对孕鼠和子鼠的安全性影响，探讨应用乙肝疫苗孕期治疗的可能性，从而为孕期HBV的抗病毒治疗提供动物实验依据。方法①14只HBV Tg雌鼠随机分为A、B两组，12只普通BALB／C雌鼠亦随机分为C、D两组。其中，A组为试验组，B、C和D组为对照组。②A、C组鼠于孕前3wk和怀孕当天分别腹腔注射乙肝疫苗10μg／只，B、D组同时腹腔注射生理盐水1mL／只。③4组雌鼠均于首次给药前、首次给药3 wk后、首次给药6 wk后采血3次，并保存血清。每组的子鼠在观察20 d后解剖处死并保存血清。④记录4组雌鼠孕期的体重、饮水量及食量，比较各组之间有无差别。⑤固相免疫放射分析(RIA)血清中的第叨军医大学硕士学位论文 HBsAg浓度，并经重复测量分析孕鼠及其子鼠血清中HBSAg浓度变化。⑥对A、B组鼠首次给药前、首次给药6 wk后的血清进行HBV DNA定量检测，并分析两组的变化。⑦用乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒检测A、C组给药后所收集的两次血清及其子鼠的血清，并分析表面抗原抗体(抗一HBs)有无产生及产生水平的差异。⑧对每组的部分孕鼠解剖，连同活胎仔一起进行毒理学的安全性检查，比较用药组与对照组有无差别;对自然分娩的子鼠进行生长发育观察。⑨应用HE染色的方法，对每组剖解的母鼠的肝、脾、肾及胎盘组织进行病理学检查，观察有无组织、细胞的异常改变。⑩在统计学软件SPSS 11 .5中进行单因素方差分析、t检验、卡方检验和重复测量分析，在 Mi erosoft Exeel中制图。结果①给药前A、B、C和D4组母鼠的平均体重分别为25.16 士2.359、25.87士1.219、24.12士2.299和24. 68士1.279，通过单因素方差分析，4组雌鼠体重总体无明显差别(P0 .05)②A、 B两组HBVTg鼠用药前的血清HBsAg浓度分别为130.76士 37.89ng/mL和243.07士83.30ng/mL，通过t检验，两组之间无显著性差异(P0 .05)。③A、B两组转基因鼠三次血清的HBsAg平均浓度按首次用药前、首次用药后3 wk、首次用药后6 wk的顺序分别为A组:130.76士37.89ng/mL、 148.93士41.58ng/mL、 159.36士79.15ng/mL;B组:143.07士83.30ng/mL、195.92士 114.24ng/mL、168.57士112.22ng/mL。经重复测量分析，A、B 组间因素效应无差异，组内三次不同时间的血清HBsAg浓度均数的差异无统计学意义，组内因素与组间因素亦无交互效应 (Pi llai’5 Traee法，P)0.05)。而子鼠中，A组30只有 14只HBsAg 阴性，B组29只中有10只HBsAg阴性。经x’检验，A、B两组子鼠 HBsAg转阴率无差异。④A、B组鼠血清中HBV DNA用药前后变化不明显。⑤A、C组鼠首次给药后3 wk、首次给药后6 wk均有部分鼠血清抗一HBs阳性，，两组鼠抗一HBs阳性率无差异(fisher精 3 第叨军医大学硕士学位论文确检验，P0 .05)。其子鼠中均未检测到抗一HBs。⑥每组鼠孕 12d一孕17d每天饮水量约为9~10ml，孕12d~孕17d的每天食量约为8一99，各组鼠的饮水量、食量从孕12d一孕17d没有明显变化。体重从孕0d~孕18d每隔2d统计一次，随孕期增加呈明显增长，但各组之间的这三个统计量无明显差异(P0 .05)。⑦解剖后的孕鼠所怀胎鼠外观形态正常，内脏检查、骨骼畸形检查均正常。各组孕鼠的黄体数、胎窝总重、胎盘总重、胎仔总重、活胎数的总体均数比较无差异(P0 .05)。剩余的各组孕鼠平均产仔数分别为A:9只、B:7只、C:8只、D:9只，总体均数无差异 (P0.05);胎鼠体重分别为A:1.49、B:1.39、C:1.29、D:1.29，总体均数无差异(P0.05)。⑧各组出生后的子鼠一般健康良好，行为正常，出生后5d、10d、15d、20d的平均体重总体均数比较均无差异(P0.05)。对小鼠的张耳天数、出毛天数、开眼天数纪录后统计，各组小鼠在这三方面的情况基本一致，分别约为出生后4d、6d、巧d。⑨经病理学检查，未发现各组孕鼠的肝、脾、肾及胎盘组织有异常病理改变。结论①孕期注射较大剂量的乙肝疫苗不会对小鼠母胎产生明显的药物急性毒副作用。②经注射乙肝疫苗，母鼠血清中 HBsAg浓度、HBv DNA未见明显下降，提示乙肝疫苗用于小鼠孕期的HBV的治疗效果不明显，但不排除乙肝疫苗作用的时间较短或HBv Tg鼠体内HBV突变的可能。③无论是HBv Tg鼠还是普通鼠都可经较大剂量的乙肝疫苗诱导产生相应抗体，但其子鼠均未检测到抗一HBs，提示注射rHBv可诱导感染HBV的机体产生相应抗体，但抗一HBs能否胎盘到达胎体还需进一步研究。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【参考文献】