重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体与人血清白蛋白融合基因的构建和表达

发布时间：2020-07-07 22:47

【摘要】：目的：提高抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体(ScFv)的稳定性，制备单链抗体-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白。方法：应用聚合酶链反应(PCR)扩增人血清白蛋白基因，并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体单链抗体(ScFv637)的载体pHEN2(pHEN2-ScFv637)上。将重组质粒pHEN2-ScFv637-HSA转化大肠杆菌Ecoli DH5α，分离提纯重组质粒后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认融合基因的正确性。将电泳检查后确认的融合基因测序。将含有融合基因的载体pHEN2(含有pelB引导肽和c-myc)在大肠杆菌Ecoli HB2151外周质中表达。应用鼠抗c-myc单克隆抗体的斑点杂交试验检查细菌外周质裂解物中融合蛋白的表达，并用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(WB)确认了融合蛋白的分子量。结果：电泳检查发现了大小分别为1770 bp和7054 bp的人血清白蛋白基因和融合基因，且位置正确；构建的ScFv637-HSA经测序发现核苷酸序列正确，并且正确克隆至载体开放渎码框架内；含有单链抗体与人血清白蛋白的融合蛋白表达在细菌外周质中，培养液上清及对照大肠杆菌外周质和培养液上清均未发现融合蛋白；用SDS-PAGE和WB发现了在分子量约为111.4KD处出现一条单一带。结论：成功地制备了单链抗体ScFv637与人血清白蛋白融合蛋白，为进一步其研究应用奠定了基础。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【参考文献】