P47抗病性GTP酶在小鼠中的组成型表达和诱导表达

发布时间：2020-07-08 01:25

【摘要】： 关于脊椎动物免疫系统现在生物学界的共识是，免疫系统有两个经典的层面，即先天性免疫系统和获得性免疫系统。两种系统的共同特征便是利用高度特化的免疫细胞(主要是白细胞)来保护肌体。最进越来越多的证据表明免疫还存在另外一个层面—细胞自主免疫，简单来说就是普通的组织细胞也可以通过细胞因子引发建立复杂的抗病机制从而保护自身。P47GTP酶便是其中之一。P47GTP酶在小鼠中有22个家族成员，可以被IFNγ大量诱导表达，被认为是细胞自主的抗病因子，具体的功能机制至今还是不很清除。 本论文的工作主要是对其中一个成员IIGP-1的研究。首先我们发现IIGP-1在健康小鼠皮肤的某些毛囊中有表达。进一步的实验显示IIGP-1在大多数的健康小鼠组织中都有本底表达，特别是在肝脏中的表达十分的强烈。通过对IFN受体敲除小鼠的检测，我们发现这种本底表达在某些组织(例如肝脏和心脏)基本上不是依赖IFN的，而在某些组织主要是依赖IFN的。最后对野生型小鼠和IFNγ受体敲除小鼠的比较表明，Listeria monocytogenes感染24小时后的肝脏有IIGP-1的表达由本底表达有大幅的提高，这种诱导完全是依赖IFNγ的。 本研究第一次揭示了P47GTP酶在健康小鼠组织中有本底水平的表达，并且第一次证明了P47GTP酶表达有IFN非依赖的途径。这结果彻底改变了IFN是P47GTP酶唯一的诱导途径的观点，从而为进一步的对P47GTP酶功能和机理的研究提供了一个全新的背景。
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392
【图文】：

更缺乏准确性了。所以这里得出的结论只能是小鼠表皮似乎(尤其是2天的)有工IGP一1的表达。免疫荧光标记(图3.2)的目的是观察工IGP一1表达在表皮中的确切位置，从上面的结果来看，的确表皮层和真皮层交界基膜(basallayer)上(keratiflocyte)的细胞质被染成了绿色，这和Dr.Haase的观察相符。但似乎角质形成细胞上方的表皮层其他部分也被或多或少的染成了绿色，这很可能是抗血清和其他物质非特异性的杂交造成的。所以，我们又试图作进一步的改进，试验不同的实验条件不同的二抗，l8

上边曾经提及HGP一和HGP一2高度的同源(氨基酸同源性达75%)，165虽然是一种特异性很强的抗体，但还是区分不开HGP一和HGP一2。而我们研究的重点是工IGP一1，这样一种能特异的识别IIGP一但不是I工GP一2的抗体是十分必需的。综合上面两点，下一步我们先纯化了IIGP一1的抗血清165/3，之后又检测了3种HGP一1的单克隆抗体的特异性。(二)IIGP一1抗血清(165/3)的亲和层析纯化:抗血清纯化的基本原理是将抗原固化在CNBr活化了的Sephar0Se凝胶柱上，之后将抗血清过柱，特异性的抗体便被和柱上的抗原结合，最后用酸或碱洗脱便可得到纯化了的抗体。在这里我们用了细菌表达的IIGP一1重组蛋白(fromUthaiah)作抗原，纯化了165/4和165/3抗血清(第4次和第3次抗原免疫后的兔抗血清)并同时纯化了165/0(抗原免疫前的血清)作为对照。

上是纯化的抗血清的SDS一PAGE考马斯亮蓝染商业购买的抗IGTP单克隆抗体作为对照，165，同理165/4F卜3是第1和第3收集部分的混收集部分的混合。注:168/120在lgG重链上端牛血清清蛋白。洗脱结果从图4.1可以看到，165/3也有少量的蛋白，165/0如所料没65/4F2，165/4的FZ和F3合在一作了SDS一PAGE和CoomaSSie染色。是工gG)话，在还原条件下将会有两条多肤链，大小分别是在55KDa

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本文编号：2745893