小鼠乳酸脱氢酶C4的原核表达及其基因疫苗的构建

发布时间：2020-07-11 12:59

【摘要】：乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)是一种睾丸特异的乳酸脱氢酶同工酶，它在精子发生的过程中及精子成熟后始终有部分位于精子的浆膜上，并利用精浆中的乳酸产生能量作为精子的动力。动物实验证明，针对LDH-C4的抗体具有避孕效果，因此，近20年来，LDH-C4一直是避孕疫苗研究开发的重要候选对象之一。 我们将小鼠LDH-C亚基全长编码序列克隆入质粒pET-28a，构建原核重组表达载体。转化大肠杆菌BL21(ED3)，经IPTG诱导表达后，通过SDS-PAGE、乳酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析对表达产物进行了鉴定。结果显示我们获得了大量具有生物活性的可溶性小鼠重组LDH-C4，为下一步大量纯化小鼠LDH-C4和动物免疫实验提供了条件。 我们同时采用带强力CMV启动子的pVAX1质粒构建了小鼠LDH-C4的真核重组表达载体，并转染Hela细胞，进行瞬时表达。通过RT-PCR在mRNA水平上鉴定到外源性LDH-C基因的转录，通过提取转染细胞总蛋白进行乳酸脱氢酶活性测定、乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析，鉴定到目的蛋白的表达。这是首次在哺乳动物细胞中表达了小鼠LDH-C4蛋白，为进行避孕基因疫苗的动物实验奠定了基础。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392
【图文】：

第二军医大学硕士学位论文5.乳酸脱氢酶同工酶的聚丙烯酞胺凝胶电泳从图6可以看出，将重组菌裂解后上清中存在的可溶性蛋白LDH一C4，在LDH一3和LDH一4之间有特异性显色，而各组对照组中均没有。图6乳酸脱氢酶同工酶的聚丙烯酞胺凝胶电泳Figure6.PAGEanalysisoflaetatede勿drogenaseisozymes1空质粒诱导前;2空质粒诱导后;3重组质粒诱导前;4重组质粒诱导后;5新鲜人血清:pET一28(a):pET

【参考文献】

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本文编号：2750438