吗啡疫苗及抗体制备的实验研究

发布时间：2020-07-13 05:52

【摘要】：本文采用免疫治疗方法探讨阿片类物质滥用的防治。用琥珀酸酐法合成6位琥珀酰吗啡(M-6-S)，将吗啡及M-6-S在碳二亚胺(EDCI)催化下，分别与大分子载体蛋白结合，形成吗啡-载体蛋白交联疫苗，并与佐剂混合免疫动物，诱导机体产生针对吗啡的特异性抗体。对免疫动物及其抗血清的性质综合评价，初步进行吗啡疫苗及抗吗啡抗体制备的实验研究。 1．吗啡疫苗的制备：盐酸吗啡制备吗啡碱，收率为83.2％，吗啡碱制备M-6-S，收率为64％；薄层层析法(TLC)鉴别M-6-S与吗啡，吗啡的比移值(R_f)为0.56，M-6-S的R_f为0.14；紫外吸收光谱(UV)鉴别M-6-S与吗啡，两者的UV光谱有所差异，但较难区分；酶联免疫吸附法(ELISA)检测四种吗啡交联疫苗的抗原性，其中吗啡直接交联疫苗(M-BC)与其它三种琥珀酰化交联疫苗同样具有良好的抗原性。 2．吗啡疫苗的免疫学评价：ELISA法检测免疫小鼠血清中抗体的滴度，6-琥珀酰吗啡-BSA组(M-6-S-BSA)血清抗体效价较高，吗啡-BC组(M-BC)、6-琥珀酰吗啡-BC组(M-6-S-BC)的抗体效价维持时间较长，四种吗啡疫苗均具有较好的免疫原性；竞争抑制实验中，吗啡及海洛因均能抑制两组(M-BC、M-6-S-BC)抗血清与包被抗原(M-6-S-BSA)的结合，并呈剂量依赖性，证明吗啡疫苗同时具有抗海洛因的作用；交叉反应实验显示，阿片类物质均能抑制抗血清与包被抗原的结合，而非阿片类物质无此抑制作用。 3．吗啡疫苗的药理学评价：在纳洛酮催促戒断实验中，与吗啡模型组相比，6-琥珀酰吗啡-KLH组(M-6-S-KLH)的跳跃次数显著降低(P＜0.05)，M-6-S-BSA组无显著差别(P＞0.05)；M-BC及M-6-S-BC组的跳跃潜伏期延长(P＜0.05)，跳跃次数明显减少(P＜0.01)，体重减轻有所改善；大剂量吗啡依赖模型中，免疫接种小鼠的体重及跳跃次数与模型组比较无明显差异(P＞0.05)，跳跃潜伏期差异显著(P＜0.05)，说明免疫疗法中和吗啡的能力有限；小鼠0.6％冰醋酸致痛模型中，与吗啡治疗组相比，免疫接种小鼠使吗啡的镇痛作用效果减弱，其差异显著 (尸0.05)，说明免疫小鼠体内产生抗体，可阻断吗啡进入大脑，减弱其镇痛作用;放免分析测定免疫接种的吗啡依赖小鼠血清和脑组织中吗啡含量，与模型组比较，血清中吗啡浓度变化不显著，脑组织中吗啡浓度显著降低(P0.01);免疫接种小鼠与正常小鼠的体重及各脏器重量比较无显著差异;疫苗连续给药，纳洛酮催促戒断后，与模型组比较，疫苗接种组的戒断症状较轻(P0.OI)，其成瘾性较低。 4.抗吗啡多克隆与单克隆抗体的制备与鉴定:免疫家兔并采血，制备抗吗啡的多克隆抗体，抗血清效价可达到1:64000以上;亲和层析纯化多抗，纯化抗体的效价较高，可达到16一SOng;体外较高浓度 (20omg/nil)的吗啡对纯化抗体与包被抗原结合有抑制作用;纳洛酮催促实验中，低、高剂量的纯化抗体对吗啡戒断症状有所影响;低、高剂量纯化抗体处理的吗啡依赖小鼠脑组织中吗啡的浓度，与模型组比较明显降低(P0.OI)。单克隆抗体的制备目前正在进行第三次克隆化筛选，有望于近期获得稳定分泌特异性单克隆抗体的细胞株。结论:研制吗啡依赖的防治疫苗，采用主动免疫方式免疫动物，诱导机体产生特异性抗体，有效阻止吗啡进入中枢神经系统，从而减弱吗啡的药理作用，降低其成瘾性，此疫苗同时能对抗海洛因成瘾，这将为防止药物滥用寻找新的治疗方向。以此为研究基础，制备抗吗啡抗体，为进一步检测疫苗的性质及制备检测试剂盒作准备。
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【参考文献】