幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆和表达

发布时间：2020-07-18 00:13

【摘要】： 目的：通过对幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆和表达，确定CagA蛋白中与相应抗体亲和力最强的肽段，为制备幽门螺杆菌高毒株感染血清学诊断试剂盒奠定基础。 方法：根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计五对引物，采用PCR方法扩增出五条幽门螺杆菌cagA基因片段。采用碱裂解法提取原核表达载体质粒pGEX-3X，并对其进行单酶切。将PCR扩增产物插入至原核表达载体pGEX-3X中，采用氯化钙转化法将连接产物转化至大肠杆菌Top10中，形成五种重组质粒。先通过氨苄平板初步筛选，再采用PCR方法筛选转化阳性的质粒，最后通过核酸限制性内切酶酶切及测序确定其连接方向。经筛选为阳性的重组质粒以1mMol／L的IPTG诱导表达，预测所表达的CagA蛋白肽段分子大小分别为66KD、29KD、36KD、99KD和63KD，并以包涵体的形式存在。包涵体经8Mol／L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力最强的CagA蛋白肽段。 结果：五条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66KD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。 结论：66KD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346

【参考文献】

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1 刘炯,许国铭;幽门螺杆菌cag致病岛的研究进展[J];中华消化杂志;1999年06期

本文编号：2760120