HBVPreS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建及其体外表达研究

发布时间：2020-07-19 22:02

【摘要】： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）可促进抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APC）的成熟和激活增强抗原的提呈，具有免疫佐剂作用。HBV前S2蛋白在介导乙肝病毒进入，肝细胞中起着重要的作用，而且前S2抗原的T细胞表位有助于提高机体对S抗原的抗体应答水平。为研究GM-CSF和PreS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用，本研究通过PCR方法、T-A克隆技术以及基因定向克隆手段，将重组人GM-CSF基因与乙肝病毒前S2抗原和表面抗原基因（HBVPreS2S，S2S）融合，构建了融合基因真核表达载体PcDNA3.1-S2S-rhGM-CSF，并在HepG2细胞中表达，初步得出以下结果： 1. 重组质粒PcDNA3.1-S2S-GM-CSF, PcDNA3.1-S2Sc，PcDNA3.1-S -GM-CSF和PcDNA3.1-Sc经酶切、PCR和DNA测序鉴定构建正确。 2. 重组质粒PcDNA3.1-S2S-GM-CSF, PcDNA3.1-S2Sc, PcDNA3.1-S -GM-CSF和PcDNA3.1-Sc可在HepG2细胞中表达, 而且表达出的蛋白 WP=10 能与相应的单克隆抗体发生特异性结合，说明融合基因表达质粒体外成 功表达； 本研究结果为新型乙肝DNA疫苗的研制奠定了一定基础。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R346

【参考文献】

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本文编号：2763026