人survivin基因的克

发布时间：2020-07-19 23:10

【摘要】：[目的] 构建survivin重组质粒并在原核系统中表达，获取高纯度的重组人survivin蛋白分子，免疫豚鼠制备抗-survivin特异性抗体。为survivin的深入研究提供基础。 [方法] 应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒，将其导入E.coli B121(Gold)中，诱导表达survivin蛋白，用Western blot检测表达产物。通过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。将获取蛋白免疫豚鼠得到抗survivin抗体，ELISA测定抗体效价，免疫组织化学检测该抗体能否特异性识别肿瘤细胞中survivin蛋白。 结果 RT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致，表达质粒在E.coli B121(Gold)中得到高效表达，表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30％以上，表达产物以包涵体的形式存在，Western blot证明表达产物具特异性。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白，其纯度达到95％以上。将获取蛋白免疫豚鼠后，ELISA测定抗体效价为1：1000，免疫组织化学表明抗survivin抗体能特异性识别肿瘤组织中survivin蛋白。 结论 本研究通过基因工程方法制备抗survivin特异性抗体，为筛选survivin在人类不同种类肿瘤中表达差异，进一步为研究survivin与肿瘤的关系了奠定基础。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

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本文编号：2763096