中国几个民族人群MBL基因启动子区主要SNP研究

发布时间：2020-07-29 12:18

【摘要】： MBL系C型凝集素超家族中胶凝素家族的重要成员，是机体天然免疫系统中的关键分子。它可识别多种病原体的糖结构，并通过调理吞噬和激活补体凝集素途径来清除病原微生物和受感染细胞。MBL功能的发挥有赖于其寡聚体结构和一定的血清浓度，血清中MBL缺乏或浓度过低是引起调理吞噬缺损的根本原因，使机体对各种病原微生物的易感性增高，可导致机体反复感染，并与自身免疫病如SLE、RA等的发生、发展有关。 MBL由肝细胞合成并分泌入血，其结构基因点突变和启动子区SNP共同决定MBL的血清水平。结构基因的每种变异体均由单碱基突变引起，致使MBL分子的胶原样区发生改变，导致突变个体血清MBL水平低下，有可能突变MBL分子的功能也受损。MBL启动了区极其复杂，含外显子0和多个调控序列，已发现启动子区7个单碱基变异和1个六碱基缺失，其中对血清MBL水平影响较大的是H/L、X/Y和P/Q等3个多态性位点，分别位于-550、-221和+4。不同的启动子基因型调控MBL基因转录水平，结合结构基因的突变体，使得不同种族人群间，甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大。 我国是一个多民族人口大国，有必要对各民族人群MBL基因的多态性情况进行调查，以便为我国MBL缺损的防治研究提供决策依据。鉴于此，我们对汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群MBL基因启动子区主要SNP位点进行了等位基因及其单倍型与基因型的研究。 目的： 1．建立特异性强、敏感性高、简单快捷的检测MBL基因启动子区SNP的技术，并适于分析其单倍型与基因型。 2．利用该技术对汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群MBL基因启动子区主要SNP位点进行研究，明确其等位基因、单倍型及其基因型的分布情况。 材料与方法： 1．收集汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群血标本，提取白细胞基因组DNA，并建立扩增包含X/Y等位基因的目的基因片段的SSP-PCR反应体系，检测MBL基因启动子区H/L和P/Q等位基因。 2.建立PCR一MB可视荧光检测技术。 3.建立PCR一MB实时(real time)荧光检测技术，分析分析汉族、低族、 白族、拉枯族及蒙古族人群MBL基因启动子区刀Y等位基因。 4.结合SSP一PCR和PCR一MB的检测结果，确定MBL基因启动子区SNP 的单倍型、基因型及其频率，分析各民族间分布的差异。 结果: 1.用红细胞裂解液和PCR缓冲液/非离子去污剂/蛋白酶K两种自配试剂 成功地提取了人白细胞基因组DNA，并以此为模板成功扩增出预期目的基因 片段。 2.所建立SSP一PCR反应体系实现了对等位基因曰L和P/Q的检测，为单 倍型及基因型分析奠定了基础。 3.建立了PCR一MB可视检测技术，简便快捷、条件要求较低，达到了分 辨单碱基差异的特异性。 4.建立了PCR一MB实时检测技术，并分析了汉族、低族、白族、拉枯族 及蒙古族普通人群MBL基因启动子区习Y等位基因。 5.确定了各民族MBL基因启动子区主要SNP位点等位基因及其单倍型 与基因型的分布情况: (l)等位基因L用在5个民族间的分布差异具有统计学意义(p0.01)， L等位基因在5个民族的总体分布均高于H等位基因;低族和白族L等位基因 频率低于汉族、拉枯族和蒙古族。 (2)刃Y、P/Q等位基因在5个民族间的分布无统计学意义差异(p0.05)， 刀Y等位基因在5个民族均以Y等位基因为主，总体达89%;P/Q等位基因在 5个民族间的分布频率较接近。 (3)各单倍型在5个民族间的分布具有统计学意义差异(p0.01):汉族、 拉枯族以单倍型LYP、LYQ为主，低族以HYP、LYQ的频率较高，而白族、 蒙古族以HYP、LYP、LYQ的频率较高。 (4)各基因型在5个民族间分布的差异具有统计学意义(p0.01):汉族 以基因型LYP/LYQ、LxP几YQ为主，侃族以LYP/LYQ、LYQ/LYQ、LXP/LYQ、 HYr/贾Q及HYP/H Yp的频率较高，白族以LYp几，YQ、LYQ/比Q、Lxp/LYQ 和HYP肛YP的频率较高，拉枯族以LYP/LYQ、Lxp几YQ及HYP/LYQ的频率 较高，蒙古族以LYP/LYQ、LYQ/LYQ、LXPILYQ和HYP肚YP的频率较高。 总体上，基因型LYP/LYQ和Lxp几YQ在5个民族均具较高频率，其总体分布 频率分别达44.1%和16.6%。 结论: 1 .PCR一MB技术特异性强，简单快捷，能进行可视检测，也能进行高通 量、自动化的实时分析，完全适用于点突变和SNP的研究，技术特点明显优 于PCR-SSCP、PCR一RFLP、PCR一550等传统的点突变或SNP检测方法。 2.联用SSP一PCR和PCR一MB技术，有利于对功能基因的单倍型及基因型 的研究。 3.汉族、低族、白族、拉枯族及蒙古族普通人群之间，MBL基因启动子 区等位基因UH的分布存在差异，刀Y和P/Q无统计学意义的差异;各单倍型 和各基因型的分布存在差异;基因型LYP/LYQ和LXP/LYQ在5个民族均有较 高的分布，其总体频率分别达44.1%及16.6%。
【学位授予单位】：中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392
【图文】：

图6SSP一PCR产物凝胶电泳图Fig·6AgarosegeleleetroPhoregramofSSP一PCRProduets3PcR-MB技术可视检测X/Y等位基因.1PcR一MB可视检测技术的MB的工作浓度在标准靶序列Tx、TY过量(l.0林mol几)的情况下，杂交后，荧光颜着探针浓度的增高而加深，无靶序列时探针不发出荧光。探针MB一Y的工作浓度:试验中各管所含有效成分及杂交结果分别见表图7。当探针浓度达0.25林mol/L时，肉眼即可看到明显的荧光

在M扩十3.5~l/L条件下荧光信号增长优于M犷+2.ommol/L、1.smmol/L条件下的反应。而在相同条件下仅含等位基因X的样本与探针MB一Y结合行实时检测则没有明显特征性信号增长，见图12B。而各反应管PCR扩增均成功，见图13。用仅含等位基因X及Y的样本分别与探针MB一X进行相应的试验也得到类似结果。肠拍.翻.劝.拍研:们翻压压压即即}·}{}}}}}厂厂抓抓{{}}{{{盯盯{{}!{{{日日i}}{}}}朋朋曰曰不不不爪爪{日}}{{{尸尸厂厂{}{}}}}下下{:}{{}}}}厂厂}}{{{而而网网III}二二亚亚卜}}{}{{{厂厂获获}}}}}}}盯盯l}}l}}}尸尸川川爪]]]曰曰压压压下下}}}川{{{日日仁仁一{川川叮叮1{}}}...「「叮叮刃刃门门叮叮叮盯盯1}}}}】】厂厂厂!{!}}}}盯盯}}1{{{{「「!口扣:::门门压压压厂厂1}}}}{{{厂厂厂;日日日}{’1111厂厂:;;;;;门门厂厂厂盯盯}{}}{{{{厂厂厂洲(((卜卜}l}!{{{iii{{{厂!!!而而而爪爪{}{{){{{厂厂「「。{!{{{盯盯{」{{{{{};:::::「「曰曰甲甲甲而而!1}}{{{{厂厂月月}{{}}}}盯盯;}}川川{{{{{{抓抓「「四四庄庄二二l热:::.1111日日〔二二)))目的的盼盼一日褂褂小斗斗砰砰阁阁阴阴阴)))贬贬份洲洲四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四四...............刃叮叮盯盯}}{}{{{}{;}}}「「门门{{{iii〔〔万万}!.}}!}{{{叮叮{洲洲脱脱;.}}}{{{{{;i}{!iii口口口口d.-护n，.﨑护.﨏二日..J﨑，目，目-.刀，爪目

本文编号：2773954