抗精子多肽抗体的制备和对人精子功能影响的实验研究

发布时间：2020-08-11 11:22

【摘要】： 受精过程包括精子成熟、附着、结合、顶体反应、穿卵、融合、皮质反应、双方配子的带反应和核聚变等过程，而抗精子抗体可通过降低精子速度、减少顶体反应率、抑制精卵结合等途径来影响精子受精功能，导致免疫性不孕。利用精子抗原来制作避孕疫苗，已成为免疫避孕的研究热点。 精子蛋白SP17位于精子顶体部位，与精子顶体跨膜蛋白Cyritestin一样，均在精-卵透明带结合、精-卵膜结合和融合过程中发挥重要作用。本研究利用已经获得的含SP17和Cyritestin表位的人工合成35肽（P3肽）和抗P3肽兔血清，探讨抗P3抗体与人精子的结合和对受精过程的影响及其程度，评价人工合成的P3肽对人精子功能的影响，旨在对其生物学特性进行深入研究。 实验分两部分进行。第一部分运用试剂盒，将P3多肽通过EDC与KLH载体蛋白结合，免疫BALB/C小鼠，收获血清经过柱纯化，获得抗P3抗体，用FITC直接标记，通过流式细胞仪检测抗体与精子结合的阳性率，即抗体与人精子的结合率，用荧光显微镜观察抗体与人精子的结合部位，并且采用免疫组化方法，以抗Cyritestin单抗为阳性对照，观察含抗P3抗体的兔血清与人精子的结合部位。第二部分将人精子与含抗体血清共同孵育，利用CASA系统检测人精子活动力，用FITC-PSA法及考马斯亮蓝法检测顶体反应率，通过SPA法检测穿卵率，评价抗体对人精子功能的影响及其程度。 抗体经纯化、标记后与精子表面的结合率可达97.7%，抗体血清与人精子孵育后，用羊抗人IgG检测阳性率从49.2%降至36.4%，荧光显微镜见精子头颈部着色，部分见赤道板或顶端荧光增强，免疫组化染色见精子头部着深褐色，与阳性对照一致。抗体血清与人精子孵育后运动速度、各项运动精子百分率及其他各项指标均显著下降，并且与抗体浓度变化有一定关系， WP=7 精子顶体反应率及穿卵率也显著下降。 结论：P3肽在精子头部表面有表达，特异性抗P3抗体可与其高度结合；抗P3抗体可显著影响精子的活动力、顶体反应和穿卵率，可干扰精子受精功能，因此P3肽对人精子受精功能有影响，具有一定的开发前景。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R392
【图文】：

1 抗体的获得纯化和检测获得的 P3-KLH 约为 500 g/ml 纯化后的特异性抗 P3 抗体的最大 A28为 1.5416 用 FITC 标记后测 A280为 1.5570 A495为 0.0919 利用公式 Igmg/ml =[A280- 0.35 A495]/1.4 计算 IgG 浓度为 1.089mg/ml 约计为 1mg/ml2 流式细胞仪检测结合率所有二维点图见细胞多密集于左下角 见图 1-1 其余直方图见图 1-23 4 5 6 计算 a b c d e 五管阳性率分别为 2.01% 49.2% 97.7%36.4% 8.45% 说明 P3 肽在精子细胞表面有高度表达 抗 P3 抗体制备纯化和标记较成功 且该抗体与人精子表面可高度特异结合

1 抗体的获得纯化和检测获得的 P3-KLH 约为 500 g/ml 纯化后的特异性抗 P3 抗体的最大 A28为 1.5416 用 FITC 标记后测 A280为 1.5570 A495为 0.0919 利用公式 Igmg/ml =[A280- 0.35 A495]/1.4 计算 IgG 浓度为 1.089mg/ml 约计为 1mg/ml2 流式细胞仪检测结合率所有二维点图见细胞多密集于左下角 见图 1-1 其余直方图见图 1-23 4 5 6 计算 a b c d e 五管阳性率分别为 2.01% 49.2% 97.7%36.4% 8.45% 说明 P3 肽在精子细胞表面有高度表达 抗 P3 抗体制备纯化和标记较成功 且该抗体与人精子表面可高度特异结合

【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 高晓平，李丹，黄明孔;固定、低渗同步法制备受精卵标本[J];癌变.畸变.突变;1994年05期

2 袁玉英,石其贤;精子功能的评价[J];生殖与避孕;1998年01期

3 陈欣洁,孙筱放;人精子体外获能最佳时间的选择[J];生殖与避孕;1998年06期

4 杨戎,魏莎莉,程绮馨;去透明带地鼠卵穿透试验与人工授精受孕率关系的临床研究[J];中国实用妇科与产科杂志;1998年02期

5 黄天华;高晓平;漆著;李丹;尹丽林;;人精子染色体研究——一种稳定的人精子染色体制备技术[J];遗传与疾病;1987年03期

本文编号：2789006