丙型肝炎病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及HCV感染者血清中抗E抗体的检测

发布时间：2020-08-13 12:40

【摘要】： 丙型肝炎病毒（HCV）是输血后非甲非乙型肝炎以及社区获得性肝炎的主要病原因子。虽然通过对献血者进行抗HCV的筛选使输血后HCV的感染率显著降低，但在高危人群中仍存在社区获得性的HCV感染。目前全世界约有1.7亿HCV感染者，其中约有50％急性感染者转变为慢性，进而发展为肝硬化和肝细胞性肝癌。HCV感染后缺乏有效的保护性免疫。目前对HCV感染尚未找到有效的治疗手段，一般采用干扰素与病毒唑联合治疗法，但此法仅对少数患者有效，因此需要提高治疗手段和发展有效的疫苗以控制HCV感染。近年来各国学者运用基因重组技术对HCV包膜糖蛋白的结构和功能进行了深入研究，以期进一步理解HCV感染后慢性化机制及病毒/宿主相互作用关系，并寻找有效的保护性疫苗及治疗药物。HCV为正链RNA病毒，属于黄病毒属的一员。其基因组全长9.4kb，编码约3000aa的多聚蛋白前体，在宿主及病毒蛋白酶的作用下，将其切割成3个结构蛋白和7个非结构蛋白，其中有2 个糖蛋白：E_1和E_2，为HCV的包膜蛋白。由于其位于病毒颗粒的最外侧，是宿主攻击的主要目标，也是HCV疫苗研究的首选抗原。第四军医大学硕士学位论文一本研究构建了含HCV H株E基因5端 1575hp片段的杆状病毒转移载W E－BacPAKS，将其与BacPAK6线性DNA共转染昆虫细胞Sfg，获得重组病毒 rE－Bac，用空斑滴定法纯化病毒，并感染Sfg进行蛋白表达。SDS－PAGE鉴定结果表明，HCV E基因在昆虫细胞中表达出多条蛋白带，其 Mr分别为 60 000、 35 000、33 000、26 000和 22 000。Western blot结果显示，表达产物可与 HCV RNA阳性感染者的血清发生反应，出现几条蛋白带。其中M为60 000的是 EZ，35 000～22 000的则可能是不同程度糖基化的q蛋白。应用表达的重组蛋白对 HCV感染者血清中的抗 E抗体进行了检测，结果总检出率为 11．4％。其中，抗HCV核心抗体阳性的血清中抗E抗体检出率低于RNA阳性血清中抗E 抗体的检出率。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R392

【参考文献】