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16-24周孕龄人胎肝细胞核蛋白质表达谱的构建

发布时间:2020-08-13 08:23
【摘要】:16-24周孕龄的人胎肝是一个处于发育时相的器官,不仅担负着物质代谢、蛋白分泌等重要生理功能,而且具有造血的机能,采用蛋白质组学研究手段系统发掘胎肝内蛋白信息将助于进一步了解胎肝机能。在蛋白质组研究中,低丰度蛋白是研究的主要瓶颈,目前解决的方法主要有两类,一是去除样品中的高丰度蛋白质;二是对样品进行分级,简化样品的复杂性。由于真核生物细胞结构的特殊性,使得亚细胞分级得以实现,通过这种方法既可以降低样品的复杂性又可实现通量化。本文通过蔗糖密度梯度离心的方法建立了细胞核蛋白提取的平台,采用免疫印迹、酶活测定和电镜的方式来观测细胞核提纯的程度,结果表明细胞核富集了5倍以上。在此基础上又根据蛋白的性质采用试剂盒进行进一步细化的分级,分为疏水、亲水和沉淀三部分。最后采用一维凝胶电泳和液相色谱质谱联用技术鉴定,总共获得422个总蛋白数据,其中明确定位于细胞核的蛋白145个,由基因组推测的新蛋白共有16个以及9个SWISS-PROT注释表明在肝脏中处于低丰度的蛋白。我们还对所得数据进行了蛋白性质分析、定位分析,表明核蛋白多为偏碱性的亲水性蛋白。由功能分类、数据库比较得到的信息显示所得到的核蛋白多为结构蛋白和参与RNA剪切且为大多数细胞所具有的蛋白。组织表达分类表明有许多蛋白不仅在肝中表达而且在脑及睾丸中也高表达,提示胎肝内表达的一些蛋白可能具有广泛的生理调节功能。对新蛋白的定位预测表明有10个蛋白可能在细胞核中表达。通过以上的生物信息学分析和文献调研综合,初步构建了人胎肝的细胞核蛋白质表达谱。
【学位授予单位】:中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R341

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本文编号:2791758

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