视网膜抗原中MHCⅠ类分子H-2～b限制性表位的鉴定

发布时间：2020-08-20 09:17

【摘要】： 目的：利用合成的肽片段鉴定视网膜抗原中的MHCI类分子H-2~b限制性表位。方法：首先利用计算机技术预测感光器间类视网膜结合蛋白(Interphotoreceptor retinoid-binding protein，IRBP)、S-抗原(Soluble retinal antigen，S-Ag)，恢复蛋白，Phosducin和色素上皮细胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor，PEDF)中的MHCⅠ类分子H-2~b限制性肽片段，随后用肽结合试验联合流式细胞仪分析选择的肽片段与MHCⅠH-2~b分子的亲和力。将这些肽片段分别与不完全弗氏佐剂制备成乳浊液，皮下注射免疫C57BL/6小鼠，8天后，处死小鼠，取出脾脏制备脾细胞悬液。在体外用γ射线灭活的相应肽致敏的未免疫同系小鼠脾细胞与之培养5天，以刺激CTLs增殖。相应肽标记的RMA-S细胞(TAP缺陷H-2~(b+)细胞)与铬孵育1小时，作为靶细胞，用~(51)Cr释放试验检测CTLs活性。结果：体外试验表明所有选择的肽均能上调且稳定MHCⅠ类分子在RMA-S细胞表面的表达，其中五种肽片段，IRBP来源的肽片段：Q-8-L(QAPVLTNL)、I-8-L(ISYEPSTL)和PEDF来源的肽片段：L-9-L(LNQPFLFVL)、S-9-L(SRIVFERKL)和S-8-L(SIIFFLPL)在体内能够诱导特异性CTLs应答，而其它17种肽片段，包括S-抗原，恢复蛋白和Phosducin等来源的肽片段则不能诱导出特异性CTLs活性。结论：IRBP来源的肽片段：Q-8-L和I-8-L以及PEDF来源的肽片段：L-9-L、S-9-L和S-8-L能够在C57BL/6小鼠体内诱导产生CTLs活性，表明Q-8-L和I-8-L以及L-9-L、S-9-L和S-8-L可分别作为IRBP和PEDF中具有免疫原性的MHCⅠH-2~b限制性的肽抗原。这些具有免疫原性的CTLs特异性表位的发现将有助于我们对免疫源性匍萄膜炎发病机制的进一步了解。本研究也为寻找肿瘤抗原中具有诱导特异性CTLs能力的肽片段提供了一种策略，为制备肽片段肿瘤疫苗提供了理论基础。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R392

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本文编号：2797807