MT01对人成骨样细胞MG63表达TLR7和TLR9的影响

发布时间：2017-04-01 13:16

  本文关键词：MT01对人成骨样细胞MG63表达TLR7和TLR9的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是一种模式识别受体,早期研究发现主要表达于免疫细胞上,近来研究发现成骨相关细胞内也有TLRs的表达,且有研究表明TLRs可调控骨改建过程中成骨细胞的成骨分化。其中TLR7、9的激活可以上调白细胞介素1(Interleukin,IL-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达,进而活化破骨细胞,促进骨吸收,抑制骨形成。MT01(5'-ACCCCCTCTACCCCCTCTACCCCCTCT-3')是一种根据人线粒体DNA序列设计并人工合成的单链DNA,是一种免疫抑制性寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)。本课题组前期实验已证实,MT01可以促进成骨细胞的成骨分化、抑制大鼠牙周炎导致的牙槽骨吸收,通过减少免疫细胞内炎性因子的释放,抑制TLR7、9介导的免疫反应。但在此过程中TLR7、9自身的表达量是否也被抑制目前尚不清楚。在前期研究的基础上本研究拟通过检测人源性成骨样细胞系MG63(简称MG63)内TLRs的表达,进一步从基因及蛋白水平上探讨MT01对成骨细胞内TLR7、9表达的影响。实验目的:通过分子生物学方法检测MT01作用后,MG63内TLR7、9 m RNA及蛋白的表达,初步探讨MT01对TLR7、9 m RNA及蛋白表达的影响,为进一步研究MT01调控骨改建的免疫学机制奠定基础。实验方法:首先采用普通PCR法筛查MG63内TLR1-10 m RNA的表达情况。然后通过Real time PCR法检测MT01作用于MG63细胞12h、24h和48h后,细胞内TLR7、9 m RNA的表达;细胞免疫荧光染色法和Western Blot法检测细胞内TLR7、9蛋白的表达。检测结果采用SPSS 17.0统计软件,应用单因素方差进行统计学分析,P0.05为具有统计学意义。实验结果:普通PCR法筛查MG63内TLR1-10 m RNA的表达,结果发现MG63细胞表达TLR1-10 m RNA,其中TLR2、5和10 m RNA呈低表达,TLR1、3、4、6、7、8和9 m RNA呈高表达。通过采用Real time PCR法、细胞免疫荧光染色法和Western Blot法检测结果显示,MT01作用于细胞后,对细胞内TLR7、9 m RNA及蛋白表达有显著的抑制作用,且这种抑制作用没有明显的时间依赖性。12h和24h组中的TLR7 m RNA及蛋白的表达量显著减少,与对照组比有显著统计学差异;48h组中的TLR7 m RNA及蛋白的表达量与前两组相比略微增高,但仍低于对照组,且与对照组相比有统计学差异。12h、24h和48h组中的TLR9 m RNA及蛋白表达量均低于对照组,与对照组相比有统计学差异。结论:(1)人成骨样细胞MG63有TLR1-10 m RNA的表达,其中TLR2、5和10 m RNA呈低表达;TLR1、3、4、6、7、8和9的m RNA呈高表达。(2)MT01能抑制人成骨样细胞MG63内TLR7、9 m RNA与蛋白的表达。
【关键词】：MT01 人成骨样细胞MG63 Toll样受体 骨改建
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词表11-12
• 第1章 绪论12-27
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 文献综述13-26
• 1.2.1 TLRs家族概述13-17
• 1.2.2 TLRs与骨改建17-19
• 1.2.3 ODN概述19-24
• 1.2.4 ODN与骨改建24-26
• 1.3 研究思路26-27
• 第2章 实验材料和方法27-32
• 2.1 实验材料和试剂27-28
• 2.2 方法和步骤28-31
• 2.2.1 MG63的体外培养28
• 2.2.2 MG63最佳铺板浓度的确定28-29
• 2.2.3 普通PCR法检测MG63内TLR1-10 mRNA的表达29-30
• 2.2.4 Real time PCR法检测MT01作用后MG63内TLR7、mRNA的表达30
• 2.2.5 细胞免疫荧光染色观察MT01作用后MG63内TLR7、9蛋白的表达30-31
• 2.2.6 Western Blot法检测MT01作用后MG63内TLR7, 9 蛋白的表达31
• 2.3 数据分析和图像整理31-32
• 第3章 结果32-38
• 3.1 MG63的形态学观察32
• 3.2 MG63最佳铺板浓度32-33
• 3.3 MG63内TLRs mRNA表达33
• 3.4 MT01在不同时间点对TLR7、9 mRNA表达的影响33-34
• 3.5 MT01在不同时间点对TLR7、9 蛋白表达的影响34-38
• 第4章 讨论38-44
• 第5章 结论44-45
• 参考文献45-53
• 作者简介及在学期间取得的科研成果53-54
• 致谢54-55

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