CaP与MLCK的结合实验，原核表达的重组内抑素多聚体的分离及其抗血管生成活性

发布时间：2020-09-11 12:38

　　 平滑肌细胞收缩及其调节的分子机制长期以来一直是平滑肌研究的热点。传统的肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase，MLCK)途径仍被普遍认可，但研究也表明细肌丝结合蛋白在其中起着重要的调节作用。肌钙样蛋白calponin(CaP)就是细肌丝结合蛋白家族中的一员。一般认为，CaP通过与肌动蛋白结合而对平滑肌细胞的收缩起抑制作用。但目前对于CaP调节平滑肌细胞收缩的具体机制还无定论。 在本研究中我们发现L-MLCK N端的2Ig片段可以和CaP相结合。为了进一步加以证实，我们表达并纯化了L-MLCK氨基端2Ig区域带His-tag标记的重组蛋白(2Ig蛋白)，并用DEAE离子交换层析柱从肌丝中纯化出了纯度约为90％的CaP蛋白。再通过免疫共沉淀、overlap等方法证实了二者的相互结合。CaP与L-MLCK氨基端2Ig片段的结合也提示了CaP调节平滑肌收缩的新途径，为进一步研究其调节机制打下了基础。 本研究中同时还进行了有关血管内皮细胞抑制素(endostatin)的研究。Endostatin，尤其是原核表达的重组endostatin，由于复性及多聚体形成等因素的影响，其生物学活性一直很不稳定，限制了在临床应用中的推广。在实验中我们观察到重组endostatin极易形成多聚体，且多聚体可能也具有抗血管生成的生物学活性。为此，我们在体外表达并纯化了重组人内皮细胞抑制素(rhEndostatin)，并利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)系统分离了rhEndostatin的单体和多聚体；分离所得的单体和多聚体分别用体内鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管实验检测生物学活性，结果二者均可使CAM新生血管化率下降。在0.8μg量时单体和多聚体的抑制率分别为38％和58％，多聚体表现了比单体更强的抗血管生成能力(P＜0.05)；但当用量小于0.4μg时，虽然单体和多聚体都有明显的抗血管生成效应，但二者之间并没有显著性差别(P＞0.05)。我们的研究表明endostatin多聚体的形成不会抑制它的抗血管生成活性，也提示了其构象中二硫键的正确形成与否对其抗血管生成活性的影响不显著。
【学位单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R341

【共引文献】

相关期刊论文 前4条

1 林建韶;张建民;惠京;仇晓菲;;炎症性肌纤维母细胞瘤及低度恶性肌纤维母细胞肉瘤[J];临床与实验病理学杂志;2007年04期

2 于丹;骞爱荣;商澎;;H2-calponin在细胞力学信号感知中的作用[J];生命的化学;2012年02期

3 ;Signal transduction in the gastrointestinal smooth muscle[J];天津医科大学学报;2006年01期

4 李慧;调宁蛋白的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2003年03期

相关博士学位论文 前4条

1 洪玉;骨髓间充质干细胞体外诱导分化为光感受器样细胞的蛋白质组学研究[D];福建医科大学;2011年

2 张健;Raf-1激酶对SAH后脑血管痉挛及早期脑损伤的作用及其机制的实验研究[D];苏州大学;2011年

3 朱雪琼;子宫平滑肌肿瘤的鉴别诊断及双向电泳分析[D];浙江大学;2004年

4 徐以民;小鼠胚泡围着床期LongSAGE文库构建及相关基因研究[D];重庆医科大学;2006年

相关硕士学位论文 前2条

1 姚兴凤;68例胃肠间质瘤免疫组织化学研究[D];武汉大学;2005年

2 张影;肌球蛋白Ca～（2+）与非Ca～（2+）调节机制研究[D];大连医科大学;2006年

本文编号：2816687