O-2A祖细胞分化和两型星形胶质细胞抗原表达差异的研究

发布时间：2020-10-09 23:56

　　 神经胶质细胞是中枢神经系统内除神经元外的另一类细胞，其中星形胶质细胞以其数量、分布、形态学和功能等方面的优势占有特别重要的地位。研究表明：星形胶质细胞不仅具有营养和保护神经元的作用，而且参与神经系统的其他功能及脑的高级功能活动。 根据星形胶质细胞发生分化的“双谱系学说(T1A谱系和O-2A谱系)”，可将星形胶质细胞分为1型星形胶质细胞(type-1 astrocyte，T1A)和2型星形胶质细胞(type-2 astrocyte，T2A)两型。两型星形胶质细胞分别由两种不同抗原表达的祖细胞发育分化而来：T1A起源于抗原表型为Ran-2~+，A2B5~-的T1A前体细胞；T2A和少突胶质细胞(oligodendrocyte，OL)起源于抗原表型为Ran-2~-，A2B5~+的双潜能细胞—O-2A祖细胞(oligodendrocyte-type 2 astrocyte progenitor cells)。 目的 建立适合本实验室条件的分离纯化O-2A谱系细胞的方法，探讨O-2A祖细胞的体外分化规律，并从蛋白质水平揭示细胞骨架蛋白vimentin(波形蛋白)和钙结合蛋白S-100β在T1A和T2A分化过程中的表达差异，为双谱系细胞的后续研究奠定基础。 方法 根据T1A、O-2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同，采用振荡法和差速贴壁法，并结合使用生长因子(PDGF，bFGF)，分离纯化O-2A祖细胞，用MTT法检测其细胞活性；观察O-2A祖细胞在有血清和无血清培养条件下的分化情况；用免疫细胞化学方法，观察vimentin和S-100β在T1A、T2A的表达情况。 结果 (1)纯化的O-2A祖细胞胞体呈椭圆形，具有典型的双极突起；经免疫细胞化学染色鉴定，A2B5抗体标记阳性，细胞纯度达95％；(2)应用20％胎牛血清(FCS)诱导O-2A祖细胞定向分化为T2A，应用无血清的化学条件培养基诱导其定 O.ZA祖细胞分化和两型星形胶质细胞抗原表达差异的研究 中文摘要 向分化为OL;(3)TIA、O一ZA祖细胞均表达vimeniin和S一IOOD，未成熟TZA不表 达vimeniin，但表达S一1 00日，成熟TZA均不表达vimentin和S一1 00p。 结论(l)采用振荡法和差速贴壁法，并结合使用生长因子，建立了分离纯化 o一ZA谱系细胞的方法;(2)分离纯化的。一ZA祖细胞具有双潜能性，在体外不同培 养条件下，可以定向分化为成熟TZA和OL:(3) T IA和TZA形态不同，具有分化 抗原表达差异;(4)在星形胶质细胞的发育过程中，vimentin和S一1 00p的表达可能 存在时间和谱系间的差异。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R329
【部分图文】：

T1ACM组培养13d时，纯化的0-2A祖细胞数目增多(标尺=SOum)

生长因子组培养13d时，O-2A祖细胞振荡后培养第1天，可见克隆球(标尺=50um)

生长因子组培养14d时，O-2A祖细胞振荡后培养第2天，可见克隆球体积增大，并见有0.2A祖细胞迁移出(箭头，标尺=SOPm)

【共引文献】

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本文编号：2834404