四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织Toll样受体4及其负性调控因子IRAK-M表达的影响

发布时间：2020-10-14 05:12

　　 目的:观察Toll样受体4(TLR4)及其负性调控因子白细胞介素-1受体相关激酶M(IRAK-M)在实验性溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠黏膜中的表达,并探讨四神丸干预UC的作用机制。方法:将90只Wistar大鼠随机分成6组,即空白组,模型组,柳氮磺胺嘧啶组(0. 36 g·kg~(-1)),四神丸低、中、高剂量组(2. 5,5,10 g·kg~(-1)),每组15只。以三硝基苯磺酸/乙醇溶液法制备UC大鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠组织病理学改变;采用放射免疫法测定血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3),血清游离甲状腺素(FT4),免疫球蛋白(Ig) E,白细胞介素(IL)-2的含量;采用黄嘌呤氧化法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定大鼠血清丙二醛(MDA)的活性。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测TLR4,IRAK-M的mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠肠黏膜损伤评分显著增高(P 0. 01),大鼠血清Ig E,MDA含量显著升高(P 0. 01),FT3,FT4,IL-2,SOD表达水平显著下降(P 0. 01),TLR4 mRNA和蛋白表达显著升高(P 0. 01),IRAK-M mRNA和蛋白表达显著降低(P 0. 01);与模型组比较,各治疗组鼠肠黏膜损伤评分均显著降低(P 0. 01),Ig E,MDA含量明显下降(P 0. 05,P 0. 01),FT3,FT4,IL-2,SOD水平明显升高(P 0. 05,P 0. 01),TLR4 mRNA和蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),IRAK-M mRNA和蛋白表达水平显著升高(P 0. 01)。结论:UC的发病机制与TLR4及其负性调控因子IRAK-M的表达失衡有关,且四神丸可能通过抑制TLR4mRNA和蛋白的表达,促进其负性调控因子IRAK-M的表达,起到有效治疗UC的作用。
【文章目录】：
1 材料
    1.1 动物
    1.2 药物
    1.3 试剂
    1.4 仪器
2 方法
    2.1 造模及分组
    2.2 给药
    2.3 取材及标本制备
    2.4 肉眼观察大鼠结肠组织黏膜损伤评分
    2.5 HE染色观察大鼠结肠组织病理学改变
    2.6 检测FT3, FT4, IgE, IL-2, SOD, MDA的水平
    2.7 Real-time PCR检测TLR4, IRAK-M mRNA的表达
    2.8 免疫组化法检测TLR4, IRAK-M蛋白的表达
    2.9 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测TLR4, IRAK-M蛋白的表达
    2.1 0 统计学方法
3 结果
    3.1 对UC大鼠一般活动状态的影响
    3.2 对UC大鼠结肠大体形态学的影响
    3.3 对UC大鼠结肠组织病理形态的影响
    3.4 对UC大鼠血清IgE, IL-2, FT3, FT4, SOD, MDA水平的影响
    3.5 对UC大鼠结肠组织TLR4与IRAK-M mRNA表达的影响
    3.6 对UC大鼠结肠组织TLR4与IRAK-M蛋白定位表达的影响
    3.7 对UC大鼠结肠组织TLR4与IRAK-M蛋白表达的影响
4 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2840235