TGF-β3,HA,PTHrP对人脐带间充质干细胞成软骨分化的影响

发布时间：2020-10-14 09:04

　　 目的探讨TGF-β3、透明质酸(hyaluronic acid, HA)、甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein, PTHrP)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, HUC-MSCs)成软骨分化的影响,优化培养条件的组合方式。方法体外分离培养人脐带间充质干细胞,形态学观察,流式检测表面抗体及成脂、成骨分化鉴定。取P3代细胞,加入不同组合的细胞因子进行成软骨诱导培养,分为1～21 d TGF-β3(G1)、1～28 d TGF-β3(G2)、1～21 d TGF-β3/1～21 d HA(G3)、1～28 d TGF-β3/1～28 d HA(G4)、1～21 d TGF-β3/1～21 d HA、14～21 d PTHrP(G5)、1～28 d TGF-β3、1～28 d HA、14～28 d PTHrP(G6)、1～28 d TGF-β3、1～28 d HA、21～28 d PTHrP(G7)7组。结果诱导培养28 d和21 d相比较,TGF-β3组和TGFβ3/HA组COL2α1、COL10α1、SOX9、ACAN的表达量上升;TGFβ3/HA/PTHrP组COL2α1、SOX9、ACAN的表达量上升,COL10α1下降。培养相同天数时,TGFβ3/HA组较TGF-β3组COL2α1、SOX9、ACAN的表达量上升;TGFβ3/HA/PTHrP组同TGF-β3/HA组比较,COL2α1、ACAN、SOX9的表达量增加,COL10α1表达量下降,且PTHrP加入2周较1周效果更明显。差异均有统计学意义。HE和阿利新蓝染色结果与实时荧光定量PCR的结果一致。结论 TGF-β3、HA、 PTHrP可以不同程度的促软骨分化,其中联合应用TGF-β3,HA 28 d,在第14天时加入PTHrP一起培养,这种组合方式促进HUC-MSCs成软骨分化效果最好,且能抑制细胞肥大。
【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 人脐带间充质干细胞的鉴定
        1.3.2 人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化
        1.3.3 HE染色观察
        1.3.4 阿利新蓝染色观察
        1.3.5 荧光定量PCR检测
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1 人脐带间充质干细胞的培养及鉴定
        2.1.1 人脐带间充质干细胞形态学观察
        2.1.2 流式细胞仪检测细胞表面抗原
        2.1.3成脂成骨诱导分化能力
    2.2 不同细胞因子组合的人脐带间充质干细胞成软骨分化的能力
        2.2.1 HE染色
        2.2.2 阿利新蓝染色
        2.2.3 荧光定量PCR检测基因表达量
3 讨论

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本文编号：2840455