人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克

发布时间：2020-10-16 14:09

　　 目的 从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素α亚基(HCGα)cDNA，构建表达载体并进行了表达、纯化，为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用及为后续以噬菌体抗体库技术生产HCGα单克隆抗体作前期准备。 方法 提取新鲜人绒毛膜组织总RNA，利用RT-PCR技术扩增出HCGα cDNA，克隆于表达载体PGEX4T-1，酶切鉴定后测序，测序证实序列正确，并转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达融合蛋白GST-HCGα，并通过改变培养条件诱导表达蛋白改变表达形式。超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化，沉淀包涵体经变性、透析复性等处理，用SDS-PAGE电泳、Western印迹分析产物。 结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示NT-PCR扩增片段大小约280bp，同预期片段相符。SDS-PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有36KD左右一条明显新增条带，与预期分子量相符，Western印迹证实此结果。融合蛋白主要以包涵体形式存在，通过改变培养条件减少融合蛋白包涵体的形成。 结论 本实验成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGαcDNA，克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，表达产物有较好的免疫特异 人绒毛膜促性腺激素a亚基cDNA克隆、表达及纯化中文摘要 ，胜。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R346
【文章目录】：
引言
第一部分 HCGαcDNA的克隆及鉴定
第二部分 HCGαcDNA的表达及纯化
结论
参考文献
攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文
附录1: 实验流程图
附录2: 综述
致谢

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本文编号：2843361