Hcy诱导血管平滑肌细胞增殖相关蛋白质的比较蛋白质组学研究

发布时间：2020-10-16 18:14

　　 目的：应用比较蛋白质组学方法，观察同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌 细胞(VSMC)增殖时VSMC内蛋白质的变化，以期为Hcy诱导VSMC增殖机 制的探讨提供新的启示。方法：以Hcy诱导体外培养的VSMC增殖，流式细 胞术和MTT法观察Hcy对VSMC增殖的影响，建立Hcy诱导大鼠VSMC增 殖的模型。采用二维凝胶电泳(2-DE)技术，分离VSMC全细胞蛋白，建立 Hcy诱导增殖的VSMC和正常VSMC蛋白质2-DE表达图谱，ImageMaster2D Elite分析确认差异表达的蛋白；对差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定；得到 的肽质量指纹图谱，NCBInr数据库查询加以确认；并对差异表达的醛糖还原 酶和丙酮酸激酶进行生物学功能确认。结果：Hey能诱导VSMC细胞显著增 殖，诱导作用呈现时间和剂量的依赖关系。VSMC蛋白2-DE图谱可获得蛋白 斑点1019±52个。平行图谱配比率达到84． 29％。比较正常VSMC与Hcy诱 导后VSMC蛋白质2-DE图谱，发现了11个蛋白点发生明显而稳定的改变， 其中3个在Hcy诱导的VSMC表达明显降低，8个明显升高；质谱鉴定后，9 个蛋白得到确认，这些蛋白分别为：核纤层蛋白C、波形蛋白，LIM和SH3 蛋白1、 Wdr1类似蛋白、醛糖还原酶、丙酮酸激酶M2、 磷酸丙糖异构酶和肌 钙网蛋白，其中两个蛋白同为波形蛋白。Hcy诱导增殖的VSMC中醛糖还原 酶和丙酮酸激酶的活性增加，其活性变化与其在2-DE图谱上表达量的变化一 致，结论：在Hcy诱导VSMC增殖的过程中，糖代谢蛋白，细胞结构蛋白，肌 钙网蛋白等蛋白表达量的变化，为探索Hcy诱导VSMC增殖机制提供了新的 启示。
【学位单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R341
【文章目录】：
缩略词对照表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞增殖模型的建立
    1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 小结
第二部分 血管平滑肌细胞蛋白质2-DE图谱的制备
    1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 小结
第三部分 HCY诱导增殖的VSMC 2-DE差异谱图的制备和分
    1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 小结
第四部分 差异蛋白质的鉴定和部分差异蛋白的确认
    1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    2 实验结果
    小结
讨论
结论
参考文献
致谢
文献综述

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本文编号：2843600