长爪沙鼠非酒精性脂肪肝肝硬化模型的建立

发布时间：2020-10-22 23:26

　　 目的探讨长爪沙鼠非酒精性脂肪肝肝硬化模型的建立。方法雄性长爪沙鼠40只,给予高脂饲料0、6、12、24 w时随机处死10只动物,取肝脏观察病理变化,电镜观察肝细胞坏死及星状细胞活化情况,Western印迹法检测肝组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、基质金属蛋白酶(MMP)13、组织MMP抑制剂(TIMP1)表达。结果高脂喂养6 w后动物肝细胞30%～60%脂肪变性;12 w后动物门管区出现炎症,星状细胞激活,部分肝细胞出现凋亡;24 w出现广泛纤维化,形成肝硬化阶段的假小叶结构,肝组织CollagenⅠ、CollagenⅢ表达升高,肝细胞表现为坏死性死亡和凋亡。与0 w相比,其他各时间点肝硬化模型组动物肝脏TIMP1增加,MMP13减少。结论高脂饲料喂养长爪沙鼠24 w后形成的非酒精性脂肪肝肝硬化模型与临床患者有一定的相似性,成功率高,是一种可用的新模型。
【部分图文】：

细胞核位于细胞正中，汇管区未见异常(图2A、2D)。6w后动物肝细胞30%～60%大泡性脂肪变性(图2B)为单纯性脂肪肝模型;12w时动物肝脏细胞胞质透明，被大小不一的空泡所替代，间质有散在性多核白细胞及单个核细胞浸润(图2C)形成非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型，肝细胞出现气球样变，尤其是肝小叶中心的肝腺泡Ⅲ区，部分细胞可观察到Mallory小体(图2E)。24w时Masson染色可见动物肝脏中央静脉及汇管区周围纤维组织增生，呈条索状向肝小叶内延伸，部分包绕肝小叶，出现假小叶结构，形成肝硬化模型(图2F)。图1饲喂不同时间肝脏外观变化表1模型动物不同阶段临床指证打分表项目定义数量(只)0w6w12w24w脂肪变性分级＜33%1000033%～66%01030＞66%00710纤维化阶段无101050窦周轻度0050腺泡Ⅲ带轻度0000腺泡Ⅲ带中度0000门静脉周重度0002桥接纤维化0002肝硬化0006炎症小叶炎症1)无10650＜2个04510≥2个0000汇管区炎症无101055有0055肝细胞损伤气球样变无10400少量0600大量且显著001010病理结果－单纯性脂肪肝NASH肝硬化1)显微镜下200倍视野图2沙鼠HFD饲喂不同时间的肝脏病理变化(HE)李巍等长爪沙鼠非酒精性脂肪肝肝硬化模型的建立第13期·5323·

胞核变形、边缘化，或核收缩变小、浓缩、甚至仅留下一个致密的团块，出现凋亡;线粒体高度肿胀，密度增高并呈现多种形态(图3B)。肝硬化阶段动物肝细胞细胞核不规则，核边聚，染色质浓缩凝结成块，胞质内出现大量沟裂和空泡等，部分细胞可见凋亡小体;出现细胞膜、核膜破损，细胞坏死性死亡;线粒体高度肿胀，密度更高并呈现多种形态。内质网扩张，星状细胞激活，胞质中脂滴消失，周围有纤维束形成(图3C;3D)肝细胞外及狄氏窦胶原纤维增生。N:细胞核，M:线粒体，L:脂滴图3饲喂不同时间肝细胞超微结构变化及星状细胞活化2.4Western印迹法检测各组CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP1及MMP13蛋白表达情况CollagenⅠ、CollagenⅢ在各组肝脏中的表达呈逐渐增强的趋势，肝硬化时有显著性升高(P＜0.01，P＜0.001)。特异性分解肝脏胶原蛋白的MMP13在肝硬化时明显降低(P＜0.01)，TIMP1则明显升高(P＜0.001)。见表2，图4。表2饲喂不同时间CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP1及MMP13蛋白表达变化(x±s，n=10)组别CollagenⅠCollagenⅢTIMP1MMP130w组0．181±0．0150．178±0．0090．225±0．0200．518±0．0276w组0．148±0．0180．234±0．0190．212±0．0110．468±0．01812w组0．219±0．0370．398±0．0111)0．338±0．0100．440±0．01924w组0．269±0．0212)0．501±0．0113)0．576±0．0103)0．325±0．0072)与0w组比较:1)P＜0．05，2)P＜0．01，3)P＜0．001图4饲喂后各时间点CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP1及MMP13蛋白表达变化3
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