卵细胞成熟过程蛋白质表达差异性研究

发布时间：2020-10-23 08:22

　　 随着辅助生育技术的日趋发展，使越来越多的不孕症患者获得妊娠，但临床上仍有一类患者，在常规或体外受精治疗周期中卵子成熟和发育迟缓、有OHSS危险，如多囊卵巢综合征(PCOS)患者，对其采取常规的促排卵方案往往不能奏效或风险极大。自从1991年韩国的Cha通过人未成熟卵母细胞的体外成熟技术(IVM)获得第一个孩子以来，IVM技术逐渐显示出其重要的价值，临床上也得到越来越广泛的应用。这一技术也为我们在体外研究卵母细胞的发育和成熟的调控机理，提供了很好的基础和条件。近年来，随着分子生物学的飞速发展，众多研究表明卵子成熟与蛋白质合成、磷酸化状态的改变密不可分。已证实与卵子发育和成熟相关的调控物质包括StAR(steroidogenic acute regulatory protein)、减数分裂促进因子MPF、成熟刺激因子(MPF)、丝裂原激活蛋白激酶家族(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、cAMP／蛋白激酶A(cAMP／PKA)等等，但仍有许多未知蛋白和已知蛋白参与调节的具体过程尚不清楚，需要进一步研究。目前，随着人类基因组工作计划的完成，功能基因组的研究已成为全球的热点，人们期待从蛋白质功能水平上直接揭示疾病、发育的发生机制。蛋白质二维电泳和质谱技术的日趋成熟使这项研究飞速发展，因为它从能够从整体水平上揭示可能参与人类疾病发生、基因调控、组织发生和发育等等蛋白分子调控机制。本研究采用了蛋白二维电泳和蛋白质谱分析技术在蛋白质组水平上直接研究卵子发育、成熟的机制，全文分 内．八厂H人学灿「学L沦义 四部分来进行论述。 第一部分 女性生殖方面蛋白质组研究技术平台的建立 随着基因组测序工作的完成后，目前人类面临的艰 巨的任务就是对每一个基因所编码蛋白质功能和修饰 的研究。因此，越来越多的工作投入到对蛋白质纽的研 究上。所谓蛋白质组的研究就是对基因组所编码全部的 蛋白质的研究。这种分析包括对一个单一样品同时进行 系统化的分离、鉴定和定量的研究。自七十年代问世以 来，双向电泳是应用最广泛、最有效的一种分离来自各 种组织、细胞以及另IJ的生物样品的分离枝术。同质谱鉴 定蛋白质枝术的合用，他们是目前用于蛋白质组的最有 效的枝术手段。本研究就双向凝胶电泳和质谱枝术在卵 巢蛋白质组研究中的应用力。以探讨，试图建立蛋白质组 研究枝术平台，并将之用于女性生殖领域方面。 本实验结果女。下：高重复性和高分辨率小鼠蛋白图 谱的获得。软件分析显示，2化。和llcm银染的蛋白凝 校上的 蛋白卢、分另 有 二000多年100O多点，卫Icm考马斯 亮篮蛋白凝胶有50O多点。胶重复性好，大部分蛋白点 位于相 对相同的 位置。相对于 11c nl白 月，2 4 c m 6 月 分 辨率更高，点分离清楚；相较于考马斯亮蓝染色，银染 的灵敏度更高，检测灵敏度可达到 2 0 O 119水平。结论： 高分辨牟、重复性好的双向电泳4支术配合快速鉴定蛋白 的质谱4支术在女性生殖领域蛋白质组的研究中有着广 泛的应用前景。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R321
【部分图文】：

养液和TcM199银染的双向电泳图谱。第一向等电聚焦上样量均为3的1Icm胶条，聚焦时间16000Vh。第二向是浓度12.5%的聚丙烯酸胺两个11cm胶条同时放于一个23cmx30cm凝胶上。蛋白质银染检测，并存，通过2一DImagemaster软件分析。左侧为wM培养液的双向电泳。水平方向为等电聚焦，垂直方向为按分子量的聚丙烯酞胺凝胶点用。相对确定的位置，两张胶存在ro个左右的差异蛋白。其中质谱鉴定用箭头所标示，鉴定结果如表一所示
【引证文献】

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1 喻小燕;曹晶;谢锦云;;蛋白质组学在发育生物学研究中的应用[J];金陵科技学院学报;2006年04期

本文编号：2852780