CD36在高脂诱导的小鼠脂肪组织代谢性炎症中的作用

发布时间：2017-04-04 22:15

  本文关键词：CD36在高脂诱导的小鼠脂肪组织代谢性炎症中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：肥胖、血脂异常、脂肪肝等代谢性疾病已经成为严重影响人类健康的常见病及多发病,但其发病机制尚不完全清楚。目前认为由营养物和代谢产物所触发的低丰度的代谢性炎症反应是代谢性疾病发生发展的核心环节。脂肪酸转运酶/CD36 (fatty acid translocase/CD36, FAT/CD36)属于B类清道夫受体家族,不仅可以介导长链脂肪酸的跨膜转运,还可识别众多致炎性的内源性代谢产物,与代谢性炎症的发生密切相关。本课题选用C57BL/6J小鼠、野生型(widetype,WT)/CD36基因敲除(CD36 knockout, CD36KO)小鼠及3T3-L1脂肪细胞,研究高脂饮食对脂肪组织CD36的表达和炎症反应的影响,并进一步探讨CD36在脂肪组织代谢性炎症中的作用。方法：将8周龄雄性C57BL/6J小鼠分别随机分为普通饮食组(normal chew diet, NCD)和高脂饮食组(high fat diet, HFD),喂养14周后,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定小鼠血清游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)含量；应用荧光实时定量(Real-Time PCR, RT-PCR)和western blot检测脂肪组织中CD36及炎症因子白细胞介素1(Interleukin-1, IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1, MCP-1),巨噬细胞炎性蛋白-1(Macrophage inflammatory protein-1, MIP-1) mRNA和蛋白表达；免疫组织化学染色检测脂肪组织CD36、巨噬细胞表面标记物F4/80蛋白表达；进一步,选用8周龄雄性WT和CD36KO小鼠给予高脂饲料喂养14周,用上述方法检测WT和CD36KO小鼠的脂肪组织炎症反应。3T3-L1小鼠成纤维细胞,经诱导分化为脂肪细胞后分为：对照组(Control, CTL)、不同浓度棕榈酸处理组(Palmitic acid,PA)处理时间为24小时。采用油红O染色观察3T3-L1成纤维细胞脂滴形成情况；RT-PCR和Western Blotting检测3T3-L1脂肪细胞CD36、炎症因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)、趋化因子(MCP-1,MIP-1)、C-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化C-Jun氨基末端激酶(PhosphorylationJun N-terminal kinase, P-JNK)蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测脂肪细胞NFκB活性；提取脂筏并用western blot检测小窝蛋白1(caveolin-1)、CD36含量；免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)检测脂肪细胞CD36/TLR4共聚体的形成。结果：与普通饮食组相比,高脂饮食能使C57BL/6J小鼠血清FFA明显增加,使脂肪组织内CD36 mRNA约升高了3.23±0.64倍(P0.05),CD36蛋白表达约升高了0.49±0.10倍(P0.05)；炎症因子IL-1、TNF-α、IL-6 mRNA分别约升高了0.78±0.46倍、1.69±0.65倍、0.94±0.52倍(P0.05)；趋化因子MCP-1和MIP-1 mRNA分别约升高0.89±0.20倍、1.94±0.38倍(P0.05)；相应炎症因子TNF-α、 IL-1、IL-6,趋化因子MCP-1、MIP-1的蛋白表达也呈明显升高趋势(P0.05),同时巨噬细胞浸润显著增加。与高脂饮食喂养的WT小鼠相比,CD36KO小鼠的脂肪组织炎症因子IL-1、TNF-α、IL-6的mRNA含量分别为WT小鼠的0.56±0.12、0.35±0.097、0.27±0.051(P0.05)；趋化因子MCP-1和MIP-1的mRNA表达为WT小鼠的0.59±0.15和0.43±0.12(P0.05)；同时CD36KO小鼠脂肪组织炎症／趋化因子INF-α、IL-1、IL-6、MCP-1、MIP-1的蛋白表达也明显降低(P0.05),巨噬细胞浸润显著减少。进一步在体外细胞实验中,RT-PCR及Western Blotting检测发现棕榈酸能使脂肪细胞CD36、炎症因子(IL-1β、IL-6、 TNF-α)、趋化因子(MCP-1、MIP-1)基因蛋白表达量升高(P0.05)。提取3T3-L1脂肪细胞脂筏发现,PA处理组的定位脂筏部分CD36蛋白占总表达量的比例增加(P0.05)。免疫共沉淀发现PA能使CD36/TLR4共聚体形成增加(P0.05)。同时Western Blotting检测表明PA处理条件下PJNK/JNK水平增加(P0.05)。双荧光素酶报告基因检测发现,与对照组相比PA能使脂肪细胞NFκB活性增强(P0.05)。结论：高脂或棕榈酸能显著上调脂肪组织及脂肪细胞CD36的表达,促使CD36/TLR4共聚体的形成,进而激活JNK/NFκB炎症信号通路,参与了代谢性炎症的发生。
【关键词】：脂肪酸转运酶(FAT/CD36) 脂肪组织 CD36/TLR4共聚体 代谢性炎症
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 高脂促进C57BL/6J小鼠脂肪组织CD36表达及炎症反应15-33
• 1 材料和方法15-26
• 2 结果26-30
• 3 讨论30-33
• 第二部分 CD36基因敲除可以减轻高脂诱导的小鼠脂肪组织炎症的发生33-39
• 1 材料和方法33-34
• 2 结果34-37
• 3 讨论37-39
• 第三部分 棕榈酸促进3T3-L1脂肪细胞CD36/TLR4共聚体形成、介导代谢性炎症的产生39-55
• 1 材料和方法39-47
• 2 结果47-52
• 3 讨论52-55
• 全文总结55-56
• 参考文献56-60
• 文献综述60-70
• 参考文献65-70
• 致谢70-71
• 攻读硕士学位期间发表的论文71
• 攻读硕士学位期间参加的学术会议71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱晓海;脂肪细胞培养[J];实用美容整形外科;1994年02期

2 ;脂肪细胞也会更新换代[J];祝您健康;2009年09期

3 ;关于脂肪细胞的新发现可能有助于减肥[J];中华医学信息导报;2003年03期

4 刘婕婷;刘毅;;脂肪细胞的研究进展[J];中国美容医学;2007年02期

5 ;脂肪细胞也有抗炎作用[J];中国医院用药评价与分析;2008年06期

6 信延宁;张海峰;;运动对脂肪细胞体积和数目的影响[J];中国运动医学杂志;2011年12期

7 ;科学家新分离出的脂肪细胞可能对肥胖治疗有益[J];微循环学杂志;2012年03期

8 夏雷;张奇志;张亚楠;;脂肪细胞间信息通讯的多种机制[J];医学研究杂志;2012年11期

9 朱政,孙册,沈昭文;脂肪细胞膜凝集素的初步研究[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1984年09期

10 ;上海第二医科大学一项研究否定成人脂肪细胞不增殖观点[J];河北职工医学院学报;1995年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 温宇;杨姗姗;胡秀芬;卢慧玲;刘婧;;脂肪酸诱导脂肪细胞促酰化蛋白抵抗及机制研究[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

2 何玉秀;陈龙浩;张海峰;信延宁;;对脂肪细胞数目和体积测算方法的比较研究[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

3 周虎;洪尚宇;廖侃;夏其昌;曾嵘;;3T3-L1脂肪细胞及前脂肪细胞的分泌蛋白质的大规模鉴定[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

4 汤其群;;脂肪细胞的发育分化与肥胖的防治[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年

5 逯伟达;Hengwei Zhang;Yingchun Zhao;Rui Cao;Peijing Rong;Weikuan Gu;Jing Xiao;Dengshun Miao;Joan Lappe;Robert Recker;高海青;Gary Guishan Xiao;;人骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞在成骨细胞发生过程中抑制作用机制的研究[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年

6 钱凤芹;刘国霞;;猪脂肪细胞膜免疫调控的研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

7 马晓莉;母义明;汪保安;窦京涛;陆菊明;潘长玉;;LRP16基因增加脂肪细胞胰岛素抵抗机制的研究[A];2008中国医师协会内分泌代谢科医师分会年会论文汇编[C];2008年

8 陈思思;王彦;杨静;陈显久;廉如;;gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型糖摄取的影响及其机制研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

9 丁晓颖;彭永德;董维平;王煜非;潘晓洁;刘尚全;杨颖;;脂肪细胞对共培养体系胰岛素靶细胞胰岛素受体后信号转导影响的实验研究[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年

10 彭永德;丁晓颖;董维平;王育瑶;王煜非;程群;江博仁;杨颖;;炎症通路激活状态对3T3L1脂肪细胞胰岛素信号转导的影响[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 惠 丛;科学家为脂肪细胞平反[N];中国质量报;2004年

2 朱抗美（教授）;脂肪细胞与肥胖[N];上海中医药报;2002年

3 李学梅;减肥易反弹,原是脂肪细胞“复活”[N];新华每日电讯;2008年

4 夏;脂肪细胞庇护结核菌[N];健康报;2007年

5 刘国信;适度丰满有益健康[N];中国中医药报;2005年

6 刘元江;减肥之路,为何如此艰难？[N];医药经济报;2008年

7 晓芙;塑造理想的腰腹曲线[N];甘肃经济日报;2000年

8 储国强 支勇平;我国科学家发现调控猪肉肥瘦机理[N];新华每日电讯;2003年

9 中华医学会北京分会 方红娟;女性的脂肪细胞比男性多[N];健康报;2011年

10 兰政文;减肥新思路：以“补”瘦身[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 马世瞻;促甲状腺激素通过甘油磷酸酰基转移酶3调节甘油三酯合成[D];山东大学;2015年

2 刘品;草鱼脂肪细胞发育及HUFA对其影响的研究[D];西北农林科技大学;2015年

3 钟巧青;高密度脂蛋白对炎性脂肪细胞功能的影响[D];中南大学;2007年

4 董劭壮;炎症对脂肪细胞功能的影响及其机制探讨[D];中南大学;2007年

5 于莉莉;模式识别受体介导的脂肪细胞天然抗病毒反应[D];北京协和医学院;2014年

6 叶峰;3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的蛋白质组学及其部分相关蛋白功能的研究[D];中南大学;2011年

7 钱淑文;人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞过程中的基本特征及机制研究[D];复旦大学;2009年

8 卢建雄;营养和激素对原代培养大鼠脂肪细胞脂肪形成的调控及机理研究[D];西北农林科技大学;2005年

9 刘毅;小檗碱对3T3-L1脂肪细胞增殖、分化、凋亡及脂肪因子的影响[D];复旦大学;2007年

10 郑小燕;载脂蛋白A5对脂肪细胞甘油三酯代谢的影响及其机制探讨[D];中南大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张燕;IL-18、TNF-α对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究[D];蚌埠医学院;2015年

2 张艳艳;CD36在高脂诱导的小鼠脂肪组织代谢性炎症中的作用[D];重庆医科大学;2015年

3 蒋云;可溶性环氧化物水解酶抑制剂对脂肪细胞脂质代谢及分泌功能的影响[D];中南大学;2010年

4 王慧;黄连五种单体对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响及机制研究[D];第三军医大学;2012年

5 丁亚琴;rVisfatin干预人脂肪细胞的功能研究[D];南京医科大学;2008年

6 白亮;Sirt1在猪脂肪细胞增殖分化过程中的调控作用[D];西北农林科技大学;2007年

7 汤莎莎;促甲状腺激素对脂肪细胞促炎症因子分泌的影响[D];天津医科大学;2013年

8 路玲玲;以脂肪细胞分泌因子脂联素为靶点的具有减肥作用中药的初步筛选[D];河南中医学院;2013年

9 谢羽飞;脂肪细胞摄取载脂蛋白A5的机制[D];中南大学;2014年

10 岳晶晶;小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子、脂肪因子和脂肪酸代谢的影响[D];天津医科大学;2012年

  本文关键词：CD36在高脂诱导的小鼠脂肪组织代谢性炎症中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：286018