HSV-1，HSV-2，EBV和HCMV的基因诊断研究

发布时间：2020-10-28 16:51

　　 目的 采用一种试验方法，经PCR结合酶切同时利用内参照一次区分四种疱疹病毒感染。 方法 利用DNAstar软件包分别从HCMV，HSV-1，HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因区中设计一对共享序列引物，根据四种基因产物序列选择Sma I和BamH I作为限制性内切酶，对PCR产物进行酶切，同时在相同条件下，利用β_2-MG作为内参照，进行反应体系的内部质控，从而验证扩增是否成功。做到在一个方法中，经一次PCR扩增并结合酶切即可区分四种病毒的感染。结果与细胞培养比较从而对该试验方法作出评估。 结果 β_2-MG及共享序列引物均出现扩增条带为阳性，阳性者经Southern杂交证实特异性，再结合限制性酶切，电泳后四种病毒扩增的产物分别是HCMV 594bp，HSV-1与HSV-2均为522bp，EBV 528bp.HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp两个片段，但没有BamH I酶切位点；HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp两个片段，没有SmaI酶切位点；EBV各有一个SmaI和BamH酶切位点，分别切成101与427，246和282bp四个片段；HCMV没有两种酶切位点。用此方法检测临床标本与细胞培养比较后，得出3项重要的综合评估指标，及诊断敏感性、诊断特异性和诊断指数分别为100％，92.3％和192.3％，均在理想范围内。 结论 方法验证和评估指标证实了该法的可行性，PCR结合酶切利用内参照可作为一种简易，快速，敏感和特异的对四种疱疹病毒科病毒基因鉴别诊断方法，从而为临床提供诊断参考。此法的建立对早期发现孕妇活动性HSV-1或HCMV感染并及时予以特异治疗，防止和减少先天性畸形以及优生优育实验室监测工作有重要意义。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R346
【文章目录】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料和仪器设备
    2.2 实验方法
    2.3 方法验证与实验质量评估
3 结果
2-MG扩增产物结果'>    3.1 β₂-MG扩增产物结果
    3.2 PCR结合限制性内切酶图谱分析结果
    3.3 临床标本检验结果
    3.4 方法验证结果
    3.5 方法评估结果
4 讨论
5 小结
参考文献
致谢
文献综述

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 郑志明,MarieL.Landry,熊菊贞;Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的某些生物学特征和用内切酶分型的研究[J];病毒学报;1986年01期

本文编号：2860351