HIV-1SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达

发布时间：2020-10-28 17:49

　　 目的：构建HIV-1SF2株env基因C1区与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆中表达，以便对其表达蛋白的结构和功能进行进一步研究。 方法：用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因组的9B_1R_6质粒为模板，PCR法分别扩增出env基因C1和C3段；两个片段经Kpn Ⅰ酶切、T_4连接酶连接和扩增后，再将经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切的嵌合片段插入表达载pGEX-4T-2中，使插入片段位于谷胱甘肽S-转移酶(GST)读码框架下游的多克隆酶切位点(MCS)，构建重组表达质粒pGEX-4T-2/C1C3；重组质粒经酶切、测序鉴定后，以TSS法转入大肠杆菌DH_(5α)，IPTG诱导表达融合蛋白，最后经SDS-PAG电泳分析表达蛋白图谱。 结果：经酶切和测序分析，插入片段读码框架正确，无碱基错配，表明成功构建pGEX-4T-2/C1C3克隆；重组克隆在大肠杆菌DH_(5α)中经IPTG诱导，高效地表达出相对分子质量(M_r)为43×10~3的融合蛋白。 结论：重组质粒pGEX-4T-2/C1C3的构建和表达成功，为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R346
【文章目录】：
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材料与方法
结果
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参考文献
致谢
综述
综述参考文献

【参考文献】

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1 毛春生,金宁一,佟明华,郭志儒,殷震;人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重组痘苗中的表达[J];生物工程进展;2000年04期

2 刘巍峰,高东,王祖农,滕智平,岑山,曾毅;人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1999年01期

本文编号：2860406