甲、乙型肝炎口服二价DNA疫苗的研究
发布时间：2020-10-30 02:56
我国属于甲、乙型肝炎高发区,主要靠接种甲、乙型肝炎疫苗加以预防,由于现有的疫苗生产成本高,接种次数多等特点,使得这些疫苗难以推广应用,特别在贫困地区,需要研制一种安全、高效、方便和经济等优点的甲、乙型肝炎双价疫苗。目前,利用减毒沙门氏菌作为载体的多价DNA 口服疫苗,具有生产、免疫方便等优良特点。 本实验构建甲、乙型肝炎病毒的融合抗原基因SVPX,首先进行体外毕赤酵母细胞和CHO 细胞表达研究,结果表明,融合抗原基因在真核细胞里表达的蛋白具有甲、乙型肝炎抗原特性。构建含融合抗原基因的重组DNA 疫苗,以减毒沙门氏菌载体,进行小鼠口服免疫研究,结果表明,重组DNA 疫苗能够诱导机体产生针对两种抗原特异性体液和细胞免疫反应。同时,用IL-18 作为基因佐剂,能够进一步增强体液和细胞免疫的作用。本实验首次进行以减毒沙门氏菌为载体的甲、乙型肝炎口服二价DNA 疫苗的研究。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R392.1
【部分图文】：
挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平进行鉴定。结果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生长的单克隆 Mut+表型，仅有极个别克隆呈现 Muts表型。选取 Mut+表型。酵母表达质粒的鉴定制性内切酶双酶切鉴定与 PCR 鉴定酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX 进行 EcoR I 与 Kpn I 双酶切切和 PCR 产物进行 1%琼脂糖凝胶电泳（见图 1.2 和图 1.3）。性重组质粒经双酶切后有两条带，一条与融合基因大小（81条与空载体大小（3.6kb）相符的条带。从图 1.3 可见，阳性 扩增后，有与融合基因大小（813bp）相符的特异条带。结果酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX。
挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平进行鉴定。结果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生长的单克隆 Mut+表型，仅有极个别克隆呈现 Muts表型。选取 Mut+表型。酵母表达质粒的鉴定制性内切酶双酶切鉴定与 PCR 鉴定酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX 进行 EcoR I 与 Kpn I 双酶切切和 PCR 产物进行 1%琼脂糖凝胶电泳（见图 1.2 和图 1.3）。性重组质粒经双酶切后有两条带，一条与融合基因大小（81条与空载体大小（3.6kb）相符的条带。从图 1.3 可见，阳性 扩增后，有与融合基因大小（813bp）相符的特异条带。结果酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX。
中表达情况的检测清进行 15% SDS-PAGE 电泳白质转移到硝酸纤维素膜上，进 Western blot 检测结果中可见小相符的表达蛋白，且该蛋白因 SVPX 在酵母细胞中实现表图 1.6 RT-PCR 鉴定结果.6 Agarose gel electrophoresis of RT-L 2000 Marker；NA from the strain transformed with NA from the strain transformed with 1 2 3
【引证文献】
本文编号：2861876
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R392.1
【部分图文】：
挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平进行鉴定。结果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生长的单克隆 Mut+表型，仅有极个别克隆呈现 Muts表型。选取 Mut+表型。酵母表达质粒的鉴定制性内切酶双酶切鉴定与 PCR 鉴定酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX 进行 EcoR I 与 Kpn I 双酶切切和 PCR 产物进行 1%琼脂糖凝胶电泳（见图 1.2 和图 1.3）。性重组质粒经双酶切后有两条带，一条与融合基因大小（81条与空载体大小（3.6kb）相符的条带。从图 1.3 可见，阳性 扩增后，有与融合基因大小（813bp）相符的特异条带。结果酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX。
挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平进行鉴定。结果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生长的单克隆 Mut+表型，仅有极个别克隆呈现 Muts表型。选取 Mut+表型。酵母表达质粒的鉴定制性内切酶双酶切鉴定与 PCR 鉴定酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX 进行 EcoR I 与 Kpn I 双酶切切和 PCR 产物进行 1%琼脂糖凝胶电泳（见图 1.2 和图 1.3）。性重组质粒经双酶切后有两条带，一条与融合基因大小（81条与空载体大小（3.6kb）相符的条带。从图 1.3 可见，阳性 扩增后，有与融合基因大小（813bp）相符的特异条带。结果酵母表达质粒 pPICZαC-SVPX。
中表达情况的检测清进行 15% SDS-PAGE 电泳白质转移到硝酸纤维素膜上，进 Western blot 检测结果中可见小相符的表达蛋白，且该蛋白因 SVPX 在酵母细胞中实现表图 1.6 RT-PCR 鉴定结果.6 Agarose gel electrophoresis of RT-L 2000 Marker；NA from the strain transformed with NA from the strain transformed with 1 2 3
【引证文献】
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1 孟庆玲;减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的斯氏艾美耳球虫DNA疫苗研究[D];甘肃农业大学;2008年
本文编号：2861876
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