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乙肝病毒X蛋白抑制小鼠足细胞系MPC5增殖并促进其凋亡

发布时间:2020-10-31 03:57
   目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对条件永生型小鼠足细胞系(MPC5)增殖与凋亡的影响。方法用携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转染效率。实验分空白对照组(MPC5 group)、阴性对照组(MPC5-pEX-neo group)、HBx转染组(MPC5-pEX-HBx group)。MTT法检测足细胞存活率;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中nephrin、STAT3、JAK2、p-STAT3和p-JAK2、caspase-3蛋白表达。结果 HBx转染MPC5细胞48 h后HBx表达最高。HBx转染组中nephrin蛋白表达水平显著低于空白对照及阴性对照(均P0.01)。转染HBx基因后足细胞增殖明显受抑,同时凋亡率显著增高(均P0.01)。此外,HBx转染组STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表达较空白对照及阴性对照组均显著增高(均P0.01), caspase-3在HBx转染组中的表达也显著增高(均P0.01)。结论 HBx可下调足细胞中nephrin蛋白表达,抑制足细胞增殖,并促进其凋亡的发生。其作用机制可能与STAT3/JAK2信号通路活化有关。
【部分图文】:

足细胞,蛋白表达,转染,转染效率


Bx基因在MPC5细胞中的转染效率Table2EfficiencyofHBxgenetransfectioninMPC5(x±s,n=3)groupmRNA12hours24hours48hours72hoursMPC50.48±0.140.51±0.120.54±0.120.44±0.10MPC5-pEX-neo0.53±0.130.65±0.110.64±0.200.58±0.21MPC5-pEX-HBx0.64±0.11*#18.3±0.25**##593.42±0.56**##88.59±0.33**##*P<0.05,**P<0.01comparedwithMPC5group;#P<0.05,##P<0.01comparedwithMPC5-pEX-neogroup.*P<0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroup图1HBx转染足细胞后nephrin蛋白表达Fig1NephrinexpressionlevelafterpodocytewastransfectedwithHBx(x±s,n=3)916

足细胞,存活率,转染


基础医学与临床Basic&ClinicalMedicine2019.39(5)*P<0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroups图2不同组别足细胞的存活率的比较Fig2Survivalrateofpodocyteindifferentgroups(x±s,n=3)2.4转染HBx对足细胞凋亡的影响HBx转染组细胞凋亡率较空白对照和阴性对照组细胞均显著增高(P<0.01)(图3)。2.5高表达HBx后足细胞STAT3、p-STAT3、JAK2及p-JAK2表达增高,caspase-3表达上调转染HBx后STAT3及p-STAT3蛋白表达较空白对照及阴性对照组均增高(P<0.01),同时HBx转染组中JAK2及p-JAK2蛋白表达水平也显著增高(P<0.01),同步检测凋亡相关蛋白caspase-3(17ku),其切割产物在HBx转染组中表达显著上调(P<0.01)(图4)。3讨论HBx基因是HBV复制所必须的转录因子,可促进病毒复制,诱导细胞凋亡,在细胞转化、增殖中起重要作用。由于HBx广泛的反式激活特性,对肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞都存在影响[6],HBV-GN患儿的肾小球内均存在不同程度的HBx表达,其主要分布于肾小球足细胞胞质,足细胞胞核内也有少量表达[7],这决定了其在HBV-GN的发病机制中具有重要的作用。足细胞转染HBx48h后HBx表达量最高,而HBx转染组足细胞增殖效率明显低于对照组,这表明HBx具有抑制足细胞增殖的作用,这一结果报道相一致[7]。Nephrin蛋白表达的变化是足细胞损伤的主要标志物之一,在维持足细胞骨架及足细胞裂孔膜的完整性方面具有重要作用[8],也是蛋白尿产生的主要机制[9]。本实验结果显示转染HBx后MP
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号:2863416

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