骨骼肌在兴奋收缩偶联过程中超微结构形态变化实时研究

发布时间：2020-11-01 03:45

　　 骨骼肌在兴奋收缩偶联过程中的实时超微结构形态变化以及肌浆网内Ca~(2+)如何释放的问题是生物物理学及细胞生物学最感兴趣的研究课题之一。由于常规研究方法不能在毫秒级水平获得骨骼肌兴奋收缩偶联过程中的超微结构形态变化以及Ca~(2+)变化的相关信息，因此该课题也是目前国内外研究的难点课题之一。 本课题以探索解决上述难题为研究目标，采用计算机实时控制的电刺激(时间分辨率为10us)—超低温快速冷冻实时固定技术，结合冷冻置换技术和透射电子显微镜对骨骼肌在兴奋收缩偶联过程中各时间点的超微结构形态进行了实时分析研究，并对骨骼肌在兴奋收缩偶联过程中的超微结构形态的时相变化以及钙离子释放的可能机制进行了分析讨论。结果发现： 一、采用快速冷冻实时固定技术固定的骨骼肌内各种超微结构保存完好，清晰可见。 二、骨骼肌在兴奋收缩偶联过程中三联体的超微结构形态发生实时变化 三、骨骼肌兴奋收缩偶联时，细胞膜上及细胞内发现大量小泡 1．施加电刺激4.6ms后，细胞膜下出现大量小泡，小泡间趋向融合，形成3-8个小泡组成的多聚体。 2．电刺激24ms后小泡消失，仅残余少量有被小泡紧靠细胞膜下 结果提示细胞内钙离子浓度升高有可能通过小泡转运方式将细胞外钙离子转入细胞内实现，激光共聚焦显微镜下观察到的Ca~(2+)∶sparks现象也可能通过多个小泡聚合引起局部钙离子浓度升高。超低温快速冷冻实时固定技术及电镜技术是研究毫秒级生理活动的极为有效的手段，为今后研究生理活动的瞬时功能形态变化奠定了基础。
【学位单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：Q67
【文章目录】：
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前言
材料与方法
    一、 实验用试剂及配制
        （一） 、 实验用试剂
        （二） 、 溶液的配制
    二、 实验器械和仪器
    三、 实验动物及样品的取材
        （一） 、 实验动物
        （二） 、 样品的取材
    四、 电刺激-超低温快速冷冻固定毫秒级实时处理系统
        （一） 、 电刺激-超低温快速冷冻固定毫秒级实时处理系统的组成
        （二） 、 电刺激-超低温快速冷冻固定毫秒级实时处理系统的原理
        （三） 、 缝匠肌组织的电刺激-超低温快速冷冻固定实时处理的操作
    五、 冷冻置换
    六、 制样和电镜观察
        （一） 、 脱水、浸透和包埋
        （二） 、 切片和染色
        （三） 、 电镜观察
结果
    一、 冷冻固定后骨骼肌超微结构的特点
    二、 骨骼肌在兴奋-收缩偶联过程中超微结构形态的实时变化
        （一） 骨骼肌肌膜下小泡超微结构形态实时变化
        （二） 骨骼肌三联体的超微结构形态实时变化
讨论
    一: 电刺激-超低温快速冷冻实时固定系统建立的意义
    二: 骨骼肌三联体在兴奋一收缩偶联过程中实时超微结构形态变化与其功能的关系
    三: 骨骼肌肌膜下小泡与激光聚焦显微镜下观察Ca-2+sparks现象的关系
小结
参考文献
综述
    综述正文
    综述参考文献
学习期间发表的文章和拟发表的文章
致谢

【参考文献】

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5 杨勇骥,郑尊,余宏宇,夏金辉,夏愿耀;电刺激-冷冻固定法研究兴奋收缩偶联时骨骼肌的超微结构形态变化[J];电子显微学报;1997年03期

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本文编号：2864988