检测HBV基因组nt551位突变的特异性聚合酶链反应的建立和应用

发布时间：2020-11-01 05:18

　　 为了调查HBV基因组nt551位变异株在乙型肝炎患者中的分布，共收集HBV血清学诊断阳性且肝功能异常的乙型肝炎患者血清标本362份，用巢式PCR方法扩增到117例HBV S基因阳性的标本。根据已知的48个HBV的基因组序列和中国主要的流行亚型(adr和adw)，设计合成了3’末端(上游引物)不同的四套引物P551A-PPS、P551G-PPS、P551C-PPS和P551T-PPS。在常规PCR的基础上，探索了扩增HBV基因组nt551位突变的特异性聚合酶链反应(msPCR)。在优化试验条件中以调整退火温度和引物浓度为主。根据引物的Tm值，将退火温度由65℃开始由低到高逐步调整，至70℃时，仍然存在不同程度地非特异性扩增。在退火温度为71℃、引物浓度为800nmol/L(25μl的反应体系)时，引物nt551A和nt551G分别可产生HBV DNA特异性扩增条带。在退火温度为72℃和引物浓度为200nmol/L(25μ1的反应体系)时，引物nt551C和nt551T分别可产生HBV DNA特异性扩增。首先，采用这种msPCR方法对16份HBV S基因阳性标本进行检测，结果14份为nt551A，另外2份分别为nt551G和nt551T。DNA序列分析肯定了这一结果。初步证明该法用于鉴定HBV基因组nt551位变异株的特异性和敏感性。进一步利用该msPCR方法对另外101份HBV S基因阳性标本进行检测，发现nt551位为A的标本98例，为G的3例。综合上述结果，在117例HBV S基因阳性的标本中，nt551位为G的变异株有4例，占3.42％；nt551位为C的变异株为0；nt551位为T的罕见adr亚型野生株有1例，占0.85％；nt551位为A的野生株有112例，占95.73％。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R346
【文章目录】：
中文摘要（含关键词）
英文摘要（含关键词）
前言
第一部分 检测HBV基因组nt551位突变的特异性PCR的建立
    材料与方法
    结果
    讨论
第二部分 应用msPCR方法调查HBV S基因nt551位突变株的分布
    材料和方法
    结果
    讨论
小结
参考文献
附录
致谢
综述与参考文献
论文

【参考文献】

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1 房德兴，甘人宝，李载平，段恕诚;乙型肝炎病毒的表面抗原126位Ilie→Ser变异株[J];生物化学与生物物理学报;1996年04期

本文编号：2865073