SPAP2细胞内结构域的功能研究

发布时间：2020-11-01 11:59

　　 在细胞信号转导的众多调节过程中，蛋白质的磷酸化与去磷酸化是十分重要的环节，特定细胞蛋白质酪氨酸残基发生磷酸化是细胞信号转导的重要调节机制，它是细胞间通信、细胞生长和增殖、细胞周期调控、分化、恶性肿瘤的发生和转移、神经传导、血管形成、胚胎形成和许多遗传病及后天人类疾病的一个关键步骤。对蛋白质酪氨酸磷酸化的研究已经成为生命科学的研究热点。 SPAP2是免疫受体家族中一个包含两个ITIM和两个ITAM的跨膜蛋白质，SPAP2的细胞外部分包括6个免疫球蛋白样的结构域，细胞内部分含有两个ITIM和两个ITAM， SPAP2的基因包含16个外显子，定位于人类lq21号染色体上，全长的SPAP2共734个氨基酸残基，细胞内片段有137个氨基酸残基。当有细胞外信号刺激并激活SPAP2时，镶嵌在其细胞内部的两个ITIM和两个ITAM之中的酪氨酸发生磷酸化，能够诱导胞浆内的SH2-domain containing PTP和PTK由胞浆向细胞膜迁移，并且结合到磷酸化的ITIM和ITAM上，继续进行下游信号转导。可见研究SPAP2对于揭示SH2-domain containing PTP的生理功能，以及通过研究SPAP2来发现与其结合的其它PTP和PTK有重要意义。 SPAP2基因细胞内结构域的克隆表达 我们利用基因工程技术成功地克隆了SPAP2CT基因，并且构建了可溶性表达载体pGex-2T-SPAP2CT质粒，经序列测定结果正确；将表达载体转化E. coli DE3-LysS，获得了高表达菌株并进行了高效表达。 WP=63 2．SPAP2细胞内结构域的分离纯化鉴定 我们应用离子交换、亲和层析等技术分离得到了GST-SPAP2CT，经SDS-PAGE分析，其纯度大于90%，通过Western blot验证，我们得到的蛋白质就是目的蛋白质GST-SPAP2CT。 3. SPAP2多克隆抗体的制备 我们用纯化得到的GST-SPAP2CT免疫昆明种小白鼠，通过负选择亲和层析柱和PVDF固定抗原亲和层析柱制备纯化的到了抗SPAP2CT的抗体，经ECL检测抗体效价，符合下一步实验需要，在-20 oC冰箱保存抗体。 4. SPAP2的功能研究 我们利用免疫沉淀和Western blot等生物学研究手段，对家兔不同组织中SPAP2的表达差异进行分析，同时我们也分析了在各个发育阶段小鼠多种脏器中SPAP2表达水平的变化，结果表明，在肾脏和肾上腺中SPAP2表达量很高，在肺和胰腺中SPAP2表达量较高，在心脏和肝脏中也有表达，但量很低。由此可见，SPAP2在腺体中高表达可能与调节腺体的分泌功能有关。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R341
【文章目录】：
前 言
第一部分 SPAP2基因细胞内结构域的克隆表达
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    1.3 结果与讨论
    1.4 小结
第二部分 SPAP2细胞内结构域的分离纯化鉴定
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 结果与讨论
    2.4 小结
第三部分 SPAP2多克隆抗体的制备
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
    3.3 结果与讨论
    3 4小结
第四部分 SPAP2的功能研究
    4.1 实验材料
    4.2 实验方法
    4.3 结果与讨论
    4.4 小结
参考文献
致 谢
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【参考文献】

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1 朱茂祥,吴国利;蛋白质酪氨酸脱磷酸化和信号传导[J];生物化学与生物物理进展;1993年02期

本文编号：2865500