人乳头瘤病毒液态悬浮芯片基因分型方法的建立及临床应用的初步研究

发布时间：2020-11-01 12:44

　　 本研究以液态悬浮芯片为技术平台,选取13种高、低危HPV型别作为研究对象,分别以临床出现的单独一型和混合型HPV感染为模型,建立了基因分型的新方法。应用所建立的液态悬浮芯片分型方法,对尖锐湿疣标本和宫颈糜烂标本进行了HPV基因分型的测定。 本课题以国际公认的HPV质粒作为阳性参照标准,设计了基因分型检测系统,并对HPV通用引物和探针进行了筛选,建立了PCR反应体系、杂交反应体系,对影响杂交反应的因素做了较为系统的分析,获得了最佳反应条件。质粒标准品的检测结果证明该方法可对HPV准确分型。为确立阳性诊断的标准,运用判别分析的统计学方法建立了特征判别的函数。根据判别函数,对标准样本进行回代分析,其检测的阳性准确率达96.7%以上。与反向杂交方法的对照实验显示,两种方法的符合率为82%。应用本研究方法检测126例尖锐湿疣标本和100例宫颈糜烂标本,检出率分别为79%和9%。 与反向杂交方法相比,液态悬浮芯片易于操作,省时省力,通量和敏感性更高,在临床上具有更广的发展空间。临床标本结果显示,该研究对于疾病的筛查和流行病学的预测有重要的意义。
【学位单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R373;Q789
【部分图文】：

图2液态悬浮芯片技术原理图图3加mnixe仪器照片伽mniex公司研制的微球是用两种不同颜色的荧光染料(红色和橙色)在不比例下混合后分别将直径为5.6产m的聚苯乙烯微球染成为一百种颜色的点阵。据微球所携带的独特的橙色/红色荧光配比，通过流式细胞仪时可予以区分。

液态芯片则是一种很有市场潜力的新技术。3液态生物芯片技术.31液态生物芯片的技术原理液态生物芯片也称液态悬浮芯片网，]el，该技术是一种以微球为基础的多指标数据采集和分析平台，起源于流式细胞仪。多指标检测是指在一个简单的试管中对一份样品同时进行多种指标的分析。由于流式细胞仪有区分不同大小和颜色微球的能力，使得这种方法可以用于不同类别微球群的分析。以大小进行区分的微球允许同时对多种指标进行分析，但是小微球的聚集物与大微球不能很好的区分开来，限制了这种以大小区分微球得应用范围。相比之下，用可以产生两种不同波长染料对相同大小的微球进行染色，以区分不同微球的方法得到广泛采用。

技术路线
【引证文献】

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1 姚敏杰;基于磁性微粒和荧光微球的DNA检测方法研究[D];西北大学;2007年

本文编号：2865550