成像毛细管等电聚焦电泳分析单克隆抗体电荷异质性的方法学验证及系统适用性对照品的制备

发布时间：2020-11-04 05:32

　　目的:采用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary electrofocusing electrophoresis,iCIEF)分析单抗的电荷异质性,组织国内多家质控实验室对该方法进行验证;制备用于iCIEF法的系统适用性对照品。方法:邀请19个质控实验室,应用3种品牌(4种型号)的iCIEF设备进行方法学的预验证,确定该方法的关键试剂、仪器参数设置、数据分析要点等;依据ICH_Q2_R1指导原则、2015年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)通则9101制定方法学验证方案,邀请11个质控实验室参加验证;制备基于iCIEF法的系统适用性对照品并利用SEC-HPLC、IEC-HPLC、非还原CE-SDS进行稳定性评价。结果:预验证结果显示:等电点标记物(pI Marker)为关键试剂;不同品牌、型号的iCIEF检测设备参数设置无需统一;数据处理可采用自动积分、手动积分相结合的形式。验证结果:完成了该方法的特异性、准确度、精密度、线性及其范围、耐用性、定量下限的评价;制备了iCIEF法的系统适用性对照品,并进行了加速及长期稳定性评价,制定了相应的合格标准。结论:首次组织了iCIEF的方法学验证,为《中国药典》标准提高提供方法学验证依据,为该方法制备了系统适用性对照品。
【文章目录】：
1 单抗试剂与仪器设备
    1.1 单抗及主要试剂
    1.2 仪器耗材
2 方法与结果
    2.1 iCIEF系统适用性对照品的建立
        2.1.1 建立iCIEF系统适用性对照品
        2.1.2 SEC-HPLC评价i CIEF系统适用性对照品的稳定性
            2.1.2. 1 测定参数设置
            2.1.2. 2 供试品处理
            2.1.2. 3 SEC-HPLC评价iCIEF系统适用性对照品的稳定性结果
        2.1.3 利用IEC-HPLC评价评价iCIEF系统适用性对照品的稳定性
            2.1.3. 1 测定参数设置
            2.1.3. 2 供试品处理
            2.1.3. 3 IEC-HPLC评价iCIEF系统适用性对照品的稳定性结果
        2.1.4 利用非还原CE-SDS评价iCIEF系统适用性对照品的稳定性
            2.1.4. 1 毛细管及仪器参数设置
            2.1.4. 2 供试品处理
            2.1.4. 3 非还原CE-SDS评价i CIEF系统适用性对照品的稳定性结果
    2.2 iCIEF分析单抗电荷异质性的方法学预验证（19个质控实验室, 22台iCIEF设备）
        2.2.1 方法学预验证样品检测
            2.2.1. 1 供试品预稀释
            2.2.1. 2 供试品检测
            2.2.1. 3 方法学预验证结果
    2.3 iCIEF分析单抗电荷异质性的方法学联合验证（11个质控实验室, 14台iCIEF设备）
        2.3.1 特异性
        2.3.2 准确度
        2.3.3 精密度
            2.3.3. 1 重复性检测
            2.3.3. 2 中间精密度检测
        2.3.4 定量下限（LOQ）
        2.3.5 耐用性
            2.3.5. 1 供试品溶液完成制备后在4℃条件下保存时间的耐用性
            2.3.5. 2 Pharmalyte 3-10终浓度分别在3%、4% （目标终浓度）、5%的耐用性
            2.3.5. 3 Methyl Cellulose终浓度分别在0.25%、0.35% （目标终浓度）、0.45%的耐用性
        2.3.6 线性和范围
    2.4 iCIEF系统适用性对照品的可接受标准建立
3 讨论

【参考文献】

相关期刊论文前2条

1 于传飞;郭玮;王兰;张峰;刘春雨;王文波;李萌;王军志;高凯;;成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析[J];药物分析杂志;2014年07期

2 王丽;周勇;王军志;;成像毛细管等电聚焦电泳分析糖蛋白类生物技术药物[J];中国生物制品学杂志;2012年08期

【共引文献】

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1 于传飞;郭玮;王兰;张峰;刘春雨;王文波;李萌;王军志;高凯;;成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析[J];药物分析杂志;2014年07期

2 杨靖;孙卫兵;邝玉;;抗体的系统性检测方法[J];四川生理科学杂志;2013年03期

【二级参考文献】

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1 王丽;周勇;王军志;;成像毛细管等电聚焦电泳分析糖蛋白类生物技术药物[J];中国生物制品学杂志;2012年08期

【相似文献】

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1 武刚;于传飞;王文波;李萌;王兰;;成像毛细管等电聚焦电泳分析单克隆抗体电荷异质性的方法学验证及系统适用性对照品的制备[J];药物分析杂志;2019年01期

2 余燕;邓锋;蒋忠军;;生化药物中猪、牛与羊性成分PCR检测的阳性对照品的构建[J];中国药师;2015年09期

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1 何睦;人源化抗CD20单克隆抗体理化性质和初步结晶研究[D];吉林大学;2014年