表达结核分枝杆菌ESAT-6-Ag85A基因的侵入型乳酸菌免疫特性研究
【部分图文】：
93T细胞48h后的细胞沉淀进行检测，可见在53kD处出现清晰可见的蛋白条带，而阴性对照中未见到任何的蛋白条带，如图2。2.3间接免疫荧光检测结果将构建好的真核质粒pValac-ES85A转染293T细胞，48h后使用间接免疫荧光标记目标蛋白，使用共聚焦显微镜观察(×400)，如图3A所示，转染空载体pValac质粒的细胞中，没有任何的蛋白表达;转染pValac-ES85A质粒的细胞中可以看出蛋白ES85A的大量表达(图3B);图3C中是转染阳性质粒pValac-gfp，可见有大量的gfp表达。图1ES85A和pValac的酶切片段及重组质粒酶切鉴定Fig．1IdentificationofES85AandpValacbydoubledi-gestionaswellasrecombinantplasmidbydoubledigestionNote:Fig.A.1.ProductofpValacvector(KpnⅠ/XbaⅠ)bydoubledigestion;2.ProductofES85Agene(KpnⅠ/XbaⅠ)bydoubledigestion;Fig.B.1.IdentificationofpValac-ES85Abydoubledi-gestion;M.DL5000marker.·21·中国免疫学杂志2019年第35卷
图2Westernblot检测ES85A融合蛋白在293T细胞中的表达Fig．2ExpressionofES85Afusionproteinin293TcellsbyWesternblotNote:M.Lowmolecularweightproteinmarker;1.ExpressionofcontrolvectorpValacin293Tcells;2.ExpressionofpValac-ES85Ain293Tcells.图3共聚焦显微镜观察转染293T细胞48h后ES85A蛋白的表达Fig．3ExpressionofES85Aproteinaftertransfection293Tcells48hwasobservedbyconfocalmicro-scopeNote:A.Negativecontrol:pValac;B.PlasmidpValac-ES85Aoftrans-fection;C.Positivecontrol:pValac-gfp.Cellnucleuswaslabeledusingblueandexpressingproteinorgfpwerelabeledbygreen.Theblueandgreenweremergedinthepictures.2.4流式细胞术检测表达ES85A的侵入型乳酸菌对小鼠DCs亚群的影响使用流式抗体CD11c、CD80和CD83标记处理好的脾细胞，使用流式细胞仪进行检测，检测结果如图4所示，可见与空载体组相比，表达ES85A蛋白的重组乳酸菌组更能促进小鼠脾细胞中CD11+CD80+(P＜0.001)和CD11+CD83+(P＜0.01)的表达，进而促进树突细胞的分化和成熟。2.5ELISA检测结果收集免疫后第42天的小鼠血清，使用ELISA检测小鼠血清中细胞因子IFN-γ和IL-4的表达情况。结果显示与空载体组相比，表达ES85A的重组乳酸菌中IL-4的含量显著升高，尤其是表达ES85A的侵入型乳酸菌的效果更显著(P＜0.05)，但IFN-γ含量各组之间没有显著的差异，如图5。3讨论乳酸菌属于益生菌，可以作为DNA疫苗的递送载体，但其递送效率不高［11］，为了提高递送效率，我图4?
图2Westernblot检测ES85A融合蛋白在293T细胞中的表达Fig．2ExpressionofES85Afusionproteinin293TcellsbyWesternblotNote:M.Lowmolecularweightproteinmarker;1.ExpressionofcontrolvectorpValacin293Tcells;2.ExpressionofpValac-ES85Ain293Tcells.图3共聚焦显微镜观察转染293T细胞48h后ES85A蛋白的表达Fig．3ExpressionofES85Aproteinaftertransfection293Tcells48hwasobservedbyconfocalmicro-scopeNote:A.Negativecontrol:pValac;B.PlasmidpValac-ES85Aoftrans-fection;C.Positivecontrol:pValac-gfp.Cellnucleuswaslabeledusingblueandexpressingproteinorgfpwerelabeledbygreen.Theblueandgreenweremergedinthepictures.2.4流式细胞术检测表达ES85A的侵入型乳酸菌对小鼠DCs亚群的影响使用流式抗体CD11c、CD80和CD83标记处理好的脾细胞，使用流式细胞仪进行检测，检测结果如图4所示，可见与空载体组相比，表达ES85A蛋白的重组乳酸菌组更能促进小鼠脾细胞中CD11+CD80+(P＜0.001)和CD11+CD83+(P＜0.01)的表达，进而促进树突细胞的分化和成熟。2.5ELISA检测结果收集免疫后第42天的小鼠血清，使用ELISA检测小鼠血清中细胞因子IFN-γ和IL-4的表达情况。结果显示与空载体组相比，表达ES85A的重组乳酸菌中IL-4的含量显著升高，尤其是表达ES85A的侵入型乳酸菌的效果更显著(P＜0.05)，但IFN-γ含量各组之间没有显著的差异，如图5。3讨论乳酸菌属于益生菌，可以作为DNA疫苗的递送载体，但其递送效率不高［11］，为了提高递送效率，我图4?
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