脂筏在柯萨奇病毒A组16型感染RD细胞中的作用

发布时间：2020-11-09 20:47

　　 目的探究脂筏在柯萨奇病毒A组16型(CA16)感染RD细胞中的作用。方法使用胆固醇抑制剂甲基-β-环糊精(MβCD)驱散细胞膜胆固醇并破坏脂筏,分别采用RT-PCR和Western blot技术,在mRNA以及蛋白质水平检测MβCD处理对于CA16病毒感染RD细胞的影响。在RD细胞感染不同时间使用MβCD处理,并检测其对CA16病毒感染的影响。MβCD处理后,使用添加外源胆固醇的方式对细胞膜胆固醇进行补充,观察CA16病毒感染的变化。通过Western blot检测CA16感染后宿主细胞Akt磷酸化水平的变化,以及MβCD处理对宿主细胞Akt磷酸化的影响。结果 MβCD以剂量依赖方式抑制CA16病毒对RD细胞的感染,MβCD处理浓度为2.5、5、7.5、10 mmol/L时CA16 VP1的mRNA水平和蛋白质水平表达均出现降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。在感染前1 h使用MβCD处理CA16 VP1 mRNA和蛋白质水平的表达分别降低了(84.23±3.70)%和(81.80±5.09)%,与未做处理的对照组相比具有统计学意义(P0.05)。在MβCD处理后添加200、300、400μg/ml的外源胆固醇,VP1 mRNA水平的表达恢复了(26.63±7.69)%、(77.06±6.91)%、(91.36±12.09)%,VP1蛋白质水平的表达恢复了(28.71±8.27)%、(51.14±5.82)%、(58.14±7.35)%,且VP1表达与MβCD单独处理相比差异均具有统计学意义(P0.05)。CA16感染30 min时pAkt表达上升了(91.86±27.14)%,差异具有统计学意义(P0.05)。CA16感染MβCD预处理过的细胞pAkt未发生显著变化(P0.05)。结论脂筏在CA16病毒感染RD细胞与激活PI3K/Akt通路中起重要作用。
【部分图文】：

水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。２ＭβＣＤ处理对ＣＡ１６病毒蛋白质水平的影响使用不同浓度的ＭβＣＤ对ＲＤ细胞进行预处理，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测病毒感染２４ｈ后细胞内ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白表达，结果见图２。随着ＭβＣＤ预处理浓度的不断增加，ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白呈现剂量依赖性减少，与对照组相比差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。说明ＭβＣＤ的处理可以在蛋白质水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。图２ＭβＣＤ在蛋白质水平抑制ＣＡ１６病毒Ｆｉｇ．２ＭβＣＤｉｎｈｉｂｉｔＣＡ１６ｉｎｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌ３ＭβＣＤ处理时间对ＣＡ１６病毒感染的影响在感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ分别用１０ｍｍｏｌ／ＬＭβＣＤ对ＲＤ细胞进行处理，２４ｈ后分别采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测病毒在细胞内的复制，结果见图３。感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ处理组与对照组相比，ＶＰ１ｍＲＮＡ水平表达分别降低了（８４．２３±３．７０）％、（３４．４０±１０．６１）％、（６４．６７±６．７０）％，蛋白质水平的表达分别降低了（８１．８０±５．０９）％、（２４．４０±９．６１）％、（４４．６７±６．８８）％。在感染前１ｈ用ＭβＣＤ处理细胞对ＣＡ１６病毒的感染抑制效果尤为明显，与未用药物处理的对照组相比差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。说明ＭβＣＤ对ＣＡ１６病毒的抑制主要体现在抑制病毒的入侵。·
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