足细胞自噬在膜性肾病经典动物模型中的作用及其激活可能的细胞内机制研究

发布时间：2020-11-10 10:02

　　 目的探讨足细胞自噬在膜性肾病经典动物模型中的作用及其激活可能的细胞内机制。方法将50只SPF级健康雄性SD大鼠随机平均分为被动肾炎(PHN)2d组、PHN4d组、PHN7d组、PHN21d组以及对照组,建立大鼠PHN模型。观察足细胞形态的变化和自噬泡,并计算单个肾小球足细胞的数量。采用免疫组织化学染色法对肾小球内膜攻击复合物C5b-9的沉淀和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达进行检测,用TUNEL法对肾小球内细胞凋亡进行检测,Western印迹法对肾小球自噬相关蛋白LC3、GRP78、p-PERK、p-JNK、ATF6α的表达进行检测。结果至注射抗体后第21天可见典型模性肾病改变,而其尿蛋白量自建模3 d起有显著上升,至21 d可达到(51.4±5.9)mg/24 h。P62蛋白并无在PHN模型大鼠肾小球内发生堆积,故可确定LC3Ⅱ表达的提高非自噬流受阻导致。可观察到造模早期ATF6α、p-PERK、p-JNK有逐步上升的趋势,但21 d(即后期)又开始回落。结论膜性肾病免疫介导的损伤可通过激活内质网应激从而增强足细胞自噬作用以保持其内环境的稳定及生存。
【部分图文】：

相对少于７ｄ的表达水平，如图４ａ所示。Ｐ６２蛋白并无在ＰＨＮ模型大鼠肾小球内发生堆积，如图４ｂ所示，故可确定ＬＣ３Ⅱ表达的提高非自噬流受阻导致。并且透射电镜下可观察到造模后７ｄ和２１ｄＰＨＮ模型大鼠足细胞内自噬浸泡数量相较于对照组出现明显上升，如图４所示。注：ａ为肾小球足细胞ＷＴ１抗原染色（ＤＡＢ染色×４００）；ｂ为肾小球足细胞计数，表示为均数±标准差；ｎ＝８，相较于０ｄ组，Ｐ＜０．０５图２ＰＨＮ模型大鼠肾小球足细胞特异性标记及计数注：ａ为ＰＨＮ模型大鼠肾小球内活化ｃａｓｐａｓｅ－３的表达，细胞核呈棕黄色，示肾小球内细胞凋亡；ｂ为ＴＵＮＥＬ检测图３ＰＨＮ模型大鼠肾小球内细胞凋亡（ＤＡＢ染色×４００）中国煤炭工业医学杂志２０１９年６月第２２卷第３期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ２０１９，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３·３９２·

Ｎ模型大鼠肾小球内内质网应激相关蛋白的表达相较于对照组，研究对象的肾小球内内质网应激标志物ＧＲＰ７８从造模２ｄ起呈逐渐上升趋势，７ｄ时明显比对照组高，但２１ｄ时却回落至正常水平；并且在检测非折叠蛋白反应（ｕｎｆｏｌｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｒｅ－ｓｐｏｎｓｅ，ＵＰＲ）传感器以及其下游信号分子时，可观察到造模早期ＡＴＦ６α、ｐ－ＰＥＲＫ、ｐ－ＪＮＫ有逐步上升的趋势，但２１ｄ（即后期）又开始回落，如图５所示。图５Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ＰＨＮ模型大鼠肾小球内内质网应激及其下游信号通路相关蛋白的表达３讨论肾小球基底膜足细胞下出现大量免疫复合物沉积且基底膜见弥漫性增厚是ＭＮ的主要特征，足细胞病变是其最突出的表现，故ＭＮ也可视为“足细胞病”的一种［９］。有研究［１０］显示，在ＭＮ患者中均可观察到程度不一的足细胞病变，包括足细胞泡变性、肿胀、崩解，足突融合、微融毛化等。由于足细胞类似于神经元，其体内分裂繁殖能力不强，故发生受损时将难以再生恢复［１１］。很多文献［１２］显示，肾小球硬化很大程度上是足细胞受损乃至缺失所促使的。本研究发现，ＰＨＮ模型大鼠在４ｄ起可明显观察到足突融合现象，随时间延长，足细胞病变逐步加剧，至２１ｄ可观察到一系列病变，包括胞体肿胀、足突融合以及微绒毛化等，且该时间段可见研究对象组单位肾小球足细胞绝对数目显著低于对照组。可以判断，足细胞在ＰＨＮ病变过程中确实会发生损伤乃至
【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2877805