结核分枝杆菌PE家族蛋白质Rv1818c羧基端PGRS片段免疫功能的研究

发布时间：2020-11-10 06:15

　　 结核病是目前单一致病菌感染导致死亡率最高的感染性疾病。其病原体结核杆菌,是一种细胞内寄生菌,它是以宿主免疫系统对抗微生物感染的重要成分之一——巨噬细胞作为其宿主细胞。结核感染后,机体可产生强有力的抗结核免疫应答,包括巨噬细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞等参与的细胞免疫应答及特异性体液免疫应答,以控制结核杆菌感染。然而,结核杆菌通过干扰T淋巴细胞对感染结核杆菌的巨噬细胞的识别及对抗巨噬细胞的杀菌机制等逃避宿主免疫系统的监视和攻击,在机体内长期持续存活而呈潜伏感染状态。当机体感染HIV、使用免疫抑制剂或衰老等导致免疫功能低下时,潜伏感染结核杆菌大量繁殖而引起结核病的发生。目前,全世界有三分之一的人口感染结核杆菌,其中有90%左右人群处于潜伏感染状态。这一庞大的群体是结核发病的主要来源之一,因此也是控制结核病全球性蔓延的关键环节之一。
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392
【部分图文】：

学硕士学位论文结核分支杆菌PE家族蛋白质Rvl818c梭基端片段免疫功能的研究测发现所提取的总RNA呈清晰的三条带分布(285、185、5.显降解(图9)。以质粒penNA一ESAT一6、peDNA一EP转/c3T3细胞总NRA为模板用珊I逆转录试剂盒合成总Dc以引物Pel和PpZ、Pel和PpZ进行PRC扩增检测，结果约280bp及1.4kb的特异性条带，而以此总RNA为模引物直接作PRC扩增或以空白质粒pDcNA3.1/Myc一HIS(胞的总RNA为模板进行RT一PRC扩增均未检测到任何表明结核分支杆菌免疫优势抗原ESAT一6完整基T一6一PGRS融合基因能在Balb/c3T3细胞中进行稳定表图11)。附图

Pel和P3e及PPI和PpZ分别进行PRC扩增，前二者均得到大小约28b0p的特异性片段，后者得到及1100Pb的特异片段，与预计目的基因片段大小相符。(图2)二.真核重组质粒pDcNA一ESAT一6及pDcNA一EP的鉴定结果:1.真核重组质粒pcDNA一ESAT一的鉴定结果:pcDNA一ESAT一6阳性重组子分别经BaHmI及EcRoI进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳分别见到28Obp及5.ksb两个片段(图3)。以pDcNA一EsAT一6为模板，Pel及PeZ为引物扩增大小约280bp的特异性片段(图4)。真核重组质粒pDcNA一ESAT一6经华大基因上海鼎安生物科技有限公司测序，测序报告(图7)确定重组质粒pDcNA一ESAT一6中正确连入ESAT一6开放读码框。上述结果表明真核重组质粒pDcNA一ESAT一6构建成功。2.真核重组质粒pDcNA一EP的鉴定结果:pcDNA一EP阳性重组子分别经BaHnlI、BspTI和EeoRI及BaHnlI和EeoRI进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳分别见到280bp、2.Ikb及5.skb、1.4kb及5.skb两个片段(图5)。peDNA一EP为模板，Pel及PpZ为引物扩增大小约1.4kb的特异性片段(图6)。真核重组质粒pcDNA一EP经\华大基因上海鼎安生物科技有限公司测序，测序报告(图8)确定重组质粒pDcNA一EP中正确连入ESAT一6及PGRSRv18‘8c，且二者通过酶切位点BPsTI连接形成融合基因。上述结果表明真核重组质粒pcDNA一Ep构建成功。三.真核表达重组质粒pDcNA一ESAT一6及pcDNA一EP稳定表达的RT一PCR鉴定结果:真核表达重组质粒pcDNA一ESAT一6及pDcNA一EP稳定转染Balb/c3T3细胞用Trizol试剂提取细胞总RNA

图4重组质粒pDcNAeeESAT一的PCR鉴PCRamPlifieationofES戌I二6rfagmentrfoPlasmidPeDNA~ESA】二6M.marker(DL20(犯)，.APCRPorductESAeesrtrietionenZymemapofereomb三nantPla
【共引文献】

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本文编号：2877586