去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性研究
【部分图文】：
?C端肽标准品，上海广锐生物科技有限公司提供，批号：201608；牛Ⅰ型胶原N端肽标准品，上海广锐生物科技有限公司提供，批号：201608。去端肽Ⅰ型胶原蛋白为白色或淡黄色海绵状固体。胶原蛋白海绵具有网状多孔支架结构，在扫描电镜下观察到胶原海绵表面呈纤维状，见图2所示，其孔径大小在500nm以内；在透射电镜下观察胶原蛋白海绵纤维结构，200nm条件下可清晰地看到胶原纤维形态上呈现“横纹带或横纹褶皱”，见图3中箭头所示，而这横纹带或横纹褶皱正是Ⅰ型胶原三螺旋纤维的典型表现[8-9]。图1Ⅰ型胶原蛋白三螺旋结构Figure1Triple-helicalstructureoftypeIcollagen
量浓度分别为0.016，0.03125，0.0625，0.125，0.25，0.5，1，2，4mg/L的Gal-牛血清白蛋白标准品。将裂解好的样本和标准曲线样本分别与等体积抗α-Gal抗体反应，静置、离心后，取适当上清液与固相抗原反应，依照ELISA法对样本残留的抗α-Gal抗体进行检测。1.6统计学分析数据采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，正态分布数据用x_±s表示，将数据进行方差分析。当P≤0.01时表示差异有非常显著性意义，当P≤0.05时表示差异有显著性意义。图2扫描电镜下胶原蛋白海绵三维多孔网状支架结构Figure2Three-dimensionalporousreticularscaffoldstructureofcollagenspongeunderelectronmicroscope图注：可清晰地看到胶原纤维形态上呈现“横纹带或横纹褶皱”，见箭头所示。图3艾瑞金胶原蛋白海绵200nm条件下透射电子显微镜图片(×26500)Figure3TransmissionelectronmicroscoperesultofErigincollagenspongeat200nm(×26500)44
值，t检验结果显示3组样品吸光度值比较差异无显著性意义(P>0.05)。依据测试结果，以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标作图，绘制标准曲线，其方程式为其方程式为y=0.152x+0.191(R2=0.97)，然后将样品的吸光度值代入回归方程，得到端N端肽浓度。从表4可看出，3个批次的去端肽Ⅰ型胶原蛋白均未检出胶原N端肽，说明样品中胶原N端肽浓度明显低于试剂盒270kD180kD90kDγβα1α2图4去端肽Ⅰ型胶原蛋白电泳图谱Figure4ElectrophoresisoftypeIatelocollagen表1去端肽Ⅰ型胶原蛋白C端肽吸光度检测结果Table1AbsorbancevalueofC-terminaltelopeptideintypeIatelocollagen组别吸光度值组别吸光度值组别吸光度值A10.045B11.208C10.120A20.044B20.795C20.099A32.886B30.712C30.081A42.850B40.429C40.095A52.399B50.424C50.106A62.421B60.129C60.109A71.222B70.095C70.108表注：A1、A2为空白对照孔检测结果；A3-B5为标准品检测结果；B6、B7、C1为批号20160503去端肽Ⅰ型胶原蛋白检测结果；C2、C3、C4为批号20160419去端肽Ⅰ型胶原蛋白检测结果；C5、C6、C7为批号20160513去端肽Ⅰ型胶原蛋白检测结果。表2去端肽Ⅰ型胶原蛋白C端肽浓度检测结果(nmol/L)Table2ConcentrationofC-terminaltelopeptideintypeIatelocollagen组别C端肽浓度组别C端肽浓度组别C端肽浓度A1-B131.37C1-A2-B218.76C2-A382.540B316.23C3-A481.45B47.61C4-A567.70B57.53C5-A668.35B6-C6-A731.78B7-C7-表注：A1、A2为空白对照孔检测结果；A3-B5为标准品检测结果；B6、B7、C1为批号201
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