群体感应淬灭酶克隆表达及其对铜绿假单胞菌的影响

发布时间：2020-11-21 03:00

　　 【背景】由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药性越来越强,寻找新的抗细菌感染药物成为研究热点。【目的】克隆表达群体感应淬灭酶,探究其对铜绿假单胞菌毒力及致病性的影响。【方法】利用PCR技术从产群体感应淬灭酶的芽孢杆菌QSI-1基因组DNA中克隆出aiiA基因,将其克隆到表达载体pET30a并导入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,通过镍柱亲和层析获得纯化的N-酰基高丝氨酸内酯酶。用不同浓度的淬灭酶作用于铜绿假单胞菌,检测其对铜绿假单胞菌毒力因子产生以及生物膜形成能力的影响;以秀丽隐杆线虫为模型,考察其对线虫感染铜绿假单胞菌存活率的影响。【结果】克隆表达出群体感应淬灭酶,该酶能显著抑制铜绿假单胞菌毒力因子产生和生物膜的形成,并能降低铜绿假单胞菌对感染线虫的致死率。【结论】群体感应淬灭酶可作为一种能高效抑制细菌致病性的物质,为临床治疗细菌性感染提供新的策略。
【部分图文】：

2930微生物学通报Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn图1PCR产物电泳Figure1PCRproductsofaiiAgene图2表达的AiiA蛋白SDS-PAGE图Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein图3AiiA群体感应淬灭活性测定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA时稍有减弱，仍达到42.40%，如图4A所示。淬灭酶对鼠李糖脂也有显著的抑制作用，实验组产生鼠李糖脂的水平降到对照组的40%以下，如图4B所示。为了更好地检测总蛋白酶生成的变化，采用脱脂奶平板法，实验组溶蛋白圈大小明显小于对照组，说明淬灭酶抑制了铜绿假单胞菌蛋白酶的产生，如图4C所示。2.3群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌生物膜产生的影响采用结晶紫染色法测定淬灭酶对PA生物膜形图4群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌毒力因子产生的影响Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：绿脓菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

2930微生物学通报Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn图1PCR产物电泳Figure1PCRproductsofaiiAgene图2表达的AiiA蛋白SDS-PAGE图Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein图3AiiA群体感应淬灭活性测定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA时稍有减弱，仍达到42.40%，如图4A所示。淬灭酶对鼠李糖脂也有显著的抑制作用，实验组产生鼠李糖脂的水平降到对照组的40%以下，如图4B所示。为了更好地检测总蛋白酶生成的变化，采用脱脂奶平板法，实验组溶蛋白圈大小明显小于对照组，说明淬灭酶抑制了铜绿假单胞菌蛋白酶的产生，如图4C所示。2.3群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌生物膜产生的影响采用结晶紫染色法测定淬灭酶对PA生物膜形图4群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌毒力因子产生的影响Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：绿脓菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.

2930微生物学通报Microbiol.ChinaTel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn图1PCR产物电泳Figure1PCRproductsofaiiAgene图2表达的AiiA蛋白SDS-PAGE图Figure2SDS-PAGEanalysisofAiiAprotein图3AiiA群体感应淬灭活性测定Figure3CharacterizationofthequorumquenchingactivityofAiiA时稍有减弱，仍达到42.40%，如图4A所示。淬灭酶对鼠李糖脂也有显著的抑制作用，实验组产生鼠李糖脂的水平降到对照组的40%以下，如图4B所示。为了更好地检测总蛋白酶生成的变化，采用脱脂奶平板法，实验组溶蛋白圈大小明显小于对照组，说明淬灭酶抑制了铜绿假单胞菌蛋白酶的产生，如图4C所示。2.3群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌生物膜产生的影响采用结晶紫染色法测定淬灭酶对PA生物膜形图4群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌毒力因子产生的影响Figure4EffectsofAiiAonvirulencefactorsproductionofPseudomonasaeruginosa注：A：绿脓菌素；B：鼠李糖脂；C：蛋白酶.*：P<0.05.Note:A:Pyocyanin;B:Rhamnolipid;C:Protease.*:P<0.05.
【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2892420