pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

发布时间：2020-11-21 01:09

　　 目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 载体构建
        1.2.2 细胞准备
        1.2.3 质粒转染
        1.2.4 激光共聚焦定位
2 结果
    2.1 真核表达载体的鉴定
    2.2 阳性克隆测序及比对
    2.3 激光共聚焦显微镜观察MT2A在细胞中的定位
3 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2892288