SARS-CoV结构蛋白的表达、抗原性鉴定和DNA免疫研究
发布时间：2020-12-04 10:41
2002年底，在我国广东省最先出现的严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome，SARS），也被称为非典型肺炎，随后在全球30多个国家和地区爆发流行，其致病因子于2003年4月被鉴定为一种新的冠状病毒，命名为SARS冠状病毒（SARS-CoV），属于套病毒目（Nidovirales）、冠状病毒科（Coronaviridae）、冠状病毒属（Coronvirus），是一种球形、有包膜的单正链RNA病毒，主要引起人和动物的呼吸道和肠道疾病，其基因组长约30kb、结构为：5’-帽状结构-复制酶（rep）-刺突糖蛋白（S）-小包膜蛋白（E）-膜糖蛋白（M）-核衣壳蛋白（N）-polyA尾3’。N蛋白包绕着基因组RNA形成核衣壳，核衣壳外是含S、M、E蛋白的脂质包膜。本研究在大肠杆菌表达出了SARS-CoV的结构蛋白和3CLpro蛋白酶，并对其抗原性进行了鉴定；检测了30份SARS患者恢复期血清抗体情况；构建了全长S和N基因DNA疫苗，进行了小鼠免疫试验；还进行了N基因与绿色荧光蛋白的融合表达质粒在COS1细胞和小鼠肌肉细胞的表达试...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SARS~Cov各基因片段PCR产物及表达质粒的酶切鉴定
Marker对照MMarker对!狱3eL，’R‘，3CL，’RU3CL，”‘U图2.SARS一COV结构蛋白及3C已R()蛋白在大肠杆菌中的表达(SDS一PAGE分析)SARS一Cov结构蛋白及3CL’’阳蛋白的抗原性分析:两份抗SARS一CoVIgG强阳性的SARS恢复期血清等体积混合，作为检测抗对大肠杆菌表达的SARS一CoV各蛋白进行WesternBlot分析，结果表明，S蛋白个片段5300、5240、5338与5324均有较好的抗原性，且位于氨基端的5300、S和中间位置的5338的抗原性似乎比梭基端的5324强。M蛋白的抗原性较弱，而白与3CLPRO未见可见的反应条带(图3A，对照分别为空载体pGEX一4T一l、pE’l’一转化的宿主菌诱导样品)。N蛋白的3种分子量产物均可与SARS恢复期血清发生(图3B，对照为空载体pPROExHTa转化的宿主菌诱导样品)。N蛋白的抗原性明强，当靶蛋白电泳上样量相似时，可以发现N蛋白与血清的反应明显强于S蛋白3C)。A
第二军医大学硕士论文对照图3NMarkerN5300SARS一CoV结构蛋白及3CL，’RO蛋白的Westernblot分析4.SARS患者恢复期血清中抗SARS一CoVS、NIgG抗体ELISA检测结果:包被的抗原N42253005240检出阳性例数检出率(敏感性)83.3%50%40%用Ni一Nl人树脂以亲和层析法纯化在大肠杆菌中表达的N422、5300和5240蛋白，包被酶联板，用ELISA法检测经SARS一CoV全病毒裂解液抗原检测为抗SARS一CoVIgG阳性的30份SARS患者的恢复期血清，其中25份血清抗N蛋白IgG阳性，巧份血清抗5300蛋白IgG阳性，12份血清抗5240蛋白IgG阳性(12份为三者均阳性，15份为前二者均阳性)。结果提示N蛋白对于SARS一CoV感染的特异性诊断具有较高的敏感性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA Vaccine of SARS-Cov S Gene Induces Antibody Response in Mice[J]. Ping ZHAO, Jin-Shan KE, Zhao-Lin QIN, Hao REN, Lan-Juan ZHAO, Jian-Guo YU, Jun GAO, Shi-Ying ZHU, and Zhong-Tian QI(Department of Microbiology, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; Department of Infectious Diseases, PLA Hospital No.88, Tai’an 271000, China ). Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(01)
[2]Severe acute respiratory syndrome and its lesions in digestive system[J]. Jian-Zhong Zhang Department of Pathology,306 Hospital of PLA, Beijing 100101,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[3]Advances in clinical diagnosis and treatment of severe acute respiratory syndrome[J]. Qing-He Nie Xin-Dong Luo Wu-Li Hui The Chinese PLA Center of Diagnosis and Treatment for Infectious Diseases,Tangdu Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710038,Shaanxi Province,China Department of Epidemiology,Chinese People’s Armed Police Force Medical College,Tianjin 300162,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[4]电镜观察从非典型肺炎患者尸检标本中发现衣原体样和冠状病毒样颗粒[J]. 洪涛,王健伟,孙异临,段淑敏,陈良标,屈建国,倪安平,梁国栋,任丽丽,杨仁全,郭岚,周为民,陈杰,李德新,许文波,徐红,郭元吉,戴淑玲,毕胜利,董小平,阮力. 中华医学杂志. 2003(08)
[5]表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究[J]. 赵平,曹洁,曹明媚,朱诗应,戚中田. 自然科学进展. 2002(09)
[6]HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答[J]. 赵平,姜春鹏,赵兰娟,温新宇,戚中田. 生物化学与生物物理进展. 2002(04)
本文编号：2897454
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SARS~Cov各基因片段PCR产物及表达质粒的酶切鉴定
Marker对照MMarker对!狱3eL，’R‘，3CL，’RU3CL，”‘U图2.SARS一COV结构蛋白及3C已R()蛋白在大肠杆菌中的表达(SDS一PAGE分析)SARS一Cov结构蛋白及3CL’’阳蛋白的抗原性分析:两份抗SARS一CoVIgG强阳性的SARS恢复期血清等体积混合，作为检测抗对大肠杆菌表达的SARS一CoV各蛋白进行WesternBlot分析，结果表明，S蛋白个片段5300、5240、5338与5324均有较好的抗原性，且位于氨基端的5300、S和中间位置的5338的抗原性似乎比梭基端的5324强。M蛋白的抗原性较弱，而白与3CLPRO未见可见的反应条带(图3A，对照分别为空载体pGEX一4T一l、pE’l’一转化的宿主菌诱导样品)。N蛋白的3种分子量产物均可与SARS恢复期血清发生(图3B，对照为空载体pPROExHTa转化的宿主菌诱导样品)。N蛋白的抗原性明强，当靶蛋白电泳上样量相似时，可以发现N蛋白与血清的反应明显强于S蛋白3C)。A
第二军医大学硕士论文对照图3NMarkerN5300SARS一CoV结构蛋白及3CL，’RO蛋白的Westernblot分析4.SARS患者恢复期血清中抗SARS一CoVS、NIgG抗体ELISA检测结果:包被的抗原N42253005240检出阳性例数检出率(敏感性)83.3%50%40%用Ni一Nl人树脂以亲和层析法纯化在大肠杆菌中表达的N422、5300和5240蛋白，包被酶联板，用ELISA法检测经SARS一CoV全病毒裂解液抗原检测为抗SARS一CoVIgG阳性的30份SARS患者的恢复期血清，其中25份血清抗N蛋白IgG阳性，巧份血清抗5300蛋白IgG阳性，12份血清抗5240蛋白IgG阳性(12份为三者均阳性，15份为前二者均阳性)。结果提示N蛋白对于SARS一CoV感染的特异性诊断具有较高的敏感性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA Vaccine of SARS-Cov S Gene Induces Antibody Response in Mice[J]. Ping ZHAO, Jin-Shan KE, Zhao-Lin QIN, Hao REN, Lan-Juan ZHAO, Jian-Guo YU, Jun GAO, Shi-Ying ZHU, and Zhong-Tian QI(Department of Microbiology, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; Department of Infectious Diseases, PLA Hospital No.88, Tai’an 271000, China ). Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(01)
[2]Severe acute respiratory syndrome and its lesions in digestive system[J]. Jian-Zhong Zhang Department of Pathology,306 Hospital of PLA, Beijing 100101,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[3]Advances in clinical diagnosis and treatment of severe acute respiratory syndrome[J]. Qing-He Nie Xin-Dong Luo Wu-Li Hui The Chinese PLA Center of Diagnosis and Treatment for Infectious Diseases,Tangdu Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710038,Shaanxi Province,China Department of Epidemiology,Chinese People’s Armed Police Force Medical College,Tianjin 300162,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(06)
[4]电镜观察从非典型肺炎患者尸检标本中发现衣原体样和冠状病毒样颗粒[J]. 洪涛,王健伟,孙异临,段淑敏,陈良标,屈建国,倪安平,梁国栋,任丽丽,杨仁全,郭岚,周为民,陈杰,李德新,许文波,徐红,郭元吉,戴淑玲,毕胜利,董小平,阮力. 中华医学杂志. 2003(08)
[5]表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究[J]. 赵平,曹洁,曹明媚,朱诗应,戚中田. 自然科学进展. 2002(09)
[6]HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答[J]. 赵平,姜春鹏,赵兰娟,温新宇,戚中田. 生物化学与生物物理进展. 2002(04)
本文编号：2897454
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