均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性

发布时间：2020-12-04 11:24

　　目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值进行四参数曲线拟和,根据四参数方程计算单抗的相对活性;同时对该方法进行验证。结果:本文构建的检测方法呈典型的反S型剂量效应曲线,且反应缓冲液中添加0.4 mol·L^-1氟化钾可提高荧光响应值。对该方法进行验证,专属性强,只与抗PD-1/PD-L1单抗发生反应;2名不同分析人员重复检测6次,相对效价范围为85%～117%,总RSD为13%;准确性良好,不同浓度供试品溶液回收率均在80%～120%范围内;理论相对活性与实际测得相对活性线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法验证要求。结论:通过对HTRF检测条件的摸索及验证,建立了一种新型测定单抗活性的方法,且该方法快速简便,可用于单抗的前期筛选或后期活性检测。 

【文章来源】：药物分析杂志. 2019年01期 第45-50页 北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 仪器
        1.1.2 供试品及主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 Human PD-L1 Protein的标记
        1.2.2 HTRF法测定抗PD-1/PD-L1单抗活性
        1.2.3 实验条件的优化
        1.2.4 方法学验证
            1.2.4. 1 专属性
            1.2.4. 2 精密度
            1.2.4. 3 准确性
            1.2.4. 4 线性
2 结果
    2.1 HTRF测定抗PD-1/PD-L1单抗活性的剂量效应曲线
    2.2 实验条件的优化
    2.3 方法的专属性
    2.4 方法的重复性及精密度
    2.5 方法的准确性
    2.6 方法的线性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于均相时间分辨荧光技术（HTRF）的HSP90-HOP相互作用抑制剂活性测试方法的构建及其应用[J]. 王慧洁,周子涵,徐嘉辰,姜奋,尤启冬,徐晓莉.  药学学报. 2017(04)
[2]时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展[J]. 王泽洲,吴俊清,张永宁,章健,吴宣,吴冠英.  四川畜牧兽医. 2015(07)
[3]抗体类生物治疗药物活性测定方法[J]. 王兰,徐刚领,高凯,王军志.  中国生物工程杂志. 2015(06)
[4]单克隆抗体类生物治疗药物研究进展[J]. 王兰,朱磊,徐刚领,高凯.  中国药学杂志. 2014(23)
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[6]治疗性单克隆抗体药物的现状及发展趋势[J]. 王志明,高健,李耿.  中国生物工程杂志. 2013(06)
[7]时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展[J]. 解肖鹏,张雷.  食品与药品. 2012(05)
[8]重组抗体药物的质量控制[J]. 高凯,陶磊,王军志.  中国新药杂志. 2011(19)
[9]荧光共振能量转移新技术及其在药物筛选中的应用[J]. 梁菊,陈攀,吴文澜,尹卫平,刘志洪.  中国药学杂志. 2009(13)



本文编号：2897516