壳聚糖/卵透明带DNA口服避孕疫苗的研究

发布时间：2020-12-06 06:26

　　为探讨卵透明带DNA疫苗诱发输卵管局部粘膜免疫以阻断受精从而避免全身性免疫引起卵巢功能紊乱的可行性，本研究首先采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3 α（pZP3 α）的cDNA序列片段，以用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3 α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达，采用RT-PCR和间接免疫荧光技术（IIF）检测到了pZP3 α在HeLa细胞中的表达。然后，用壳聚糖C390包裹pVAX1-pZP3 α重组质粒成功制备成纳米微球，用原子力显微镜（AFM）观察壳聚糖-DNA微球的形态结构，其直径为100纳米到300纳米不等，平均为224.6nm，形状为球形、椭圆形等，并且测定微球对重组质粒DNA的包裹率达90％以上。将该微球体外转染HeLa细胞，用IIF法检测到了pZP3 α的表达。接着，以灌胃方式将这些DNA疫苗微球喂食小鼠，喂食五天后通过RT-PCR和IIF检测到了此DNA疫苗在小鼠小肠粘膜层细胞中的表达。壳聚糖／pVAX1-pZP3 α微球口服免疫小鼠后可以激发抗ZP3 IgA抗体反应，在... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

目的基因片断的PCR产物电泳图谱

图3.2对重组质粒进行双酶切和PCR鉴定的结果NAmarxer:LaneZ，pzssPeR扩增产物;p3。重组质粒pCR扩增产物;Lane4，p、，Axl空载体pCR扩增产物;P3。质粒经Pstl仪ba一双酶切;Lane6.pVAx】~pZp3。重组质粒;载体.

RT-PCR检测pZP3


本文编号：2900893