可调控表达人博卡病毒1型非结构蛋白NS1稳定细胞系的建立及其反式转录激活作用初探

发布时间：2020-12-22 19:55

　　人博卡病毒1型（Human bocavirus 1,HBoV1）非结构蛋白NS1是多功能蛋白,对病毒复制有重要作用,同时可诱导宿主细胞凋亡。在研究NS1蛋白功能时,降低NS1蛋白对宿主细胞的毒性作用是急需解决的问题。基于此,文中建立了可调控表达HBoV1非结构蛋白NS1的稳定细胞系。构建NS1重组慢病毒质粒（含可调控启动子）,应用转染试剂将NS1重组慢病毒质粒转染至HEK293T细胞。通过嘌呤霉素筛选抗性细胞、多西环素诱导NS1表达,建立可稳定表达NS1-100、NS1-70蛋白的HEK 293T细胞系,利用荧光标记蛋白和Western blotting检测,确定NS1蛋白的表达。并在稳定表达NS1细胞系中转染HBoV1启动子-荧光素酶基因的质粒,分析NS1的反式转录激活活性。结果表明NS1蛋白可在建立的细胞系中稳定表达,且稳定表达NS1蛋白对HBoV1启动子有较强的激活活性,为进一步研究非结构蛋白NS1的功能及人博卡病毒致病机理奠定了良好的基础。 

【文章来源】：生物工程学报. 2019年06期 北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、细胞及主要试剂
    1.2 重组慢病毒质粒pLVX-NS1-100和pLVX-NS1-70的构建
    1.3 CCK-8测定细胞活性
    1.4 重组慢病毒的包装
    1.5 病毒滴度的测定
    1.6 嘌呤霉素 （Puro） 工作浓度的确定
    1.7 稳定表达NS1-100和NS1-70细胞系的筛选
    1.8 NS1-100和NS1-70的反式转录激活活性检测
2 结果与分析
    2.1 重组质粒pLVX-NS1-70和pLVX-NS1-100的构建及鉴定
    2.2 药物对HEK 293T细胞活性影响
    2.3 DOX诱导NS1蛋白表达对细胞活性的影响
    2.4 稳定表达NS1-70或NS1-100细胞系的建立和鉴定
    2.5 NS1蛋白反式转录激活活性检测
3 讨论



本文编号：2932336