微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征

发布时间：2020-12-23 00:50

　　目的构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠(P301L突变tau转基因小鼠)以及PS19小鼠(P301S突变tau转基因小鼠)。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显著高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显著的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内... 

【文章来源】：首都医科大学学报. 2019年04期 北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 模型的构建
        1.1.1 P301S/L质粒的构建
        1.1.2 P301L转基因小鼠的繁育
        1.1.3 P301S转基因小鼠的繁育
    1.2 动物饲养
    1.3 细胞转染
    1.4 实验分组
    1.5 动物组织的取材
        1.5.1 新鲜组织裂解
        1.5.2 固定组织取材及冰冻切片
    1.6 Western blotting法检测蛋白表达
    1.7 免疫组织化学及免疫荧光法
    1.8 统计学方法
2 结果
    2.1 过表达tau40、P301L和P301S细胞模型中tau蛋白表达
    2.2 过表达tau40、P301L和P301S对HEK293细胞骨架形态的影响
    2.3 P301L和P301S转基因小鼠中tau蛋白及磷酸化tau蛋白的表达
    2.4 P301L和P301S转基因小鼠中磷酸化tau蛋白免疫组织化学染色
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]P301L突变tau蛋白转基因动物模型及其应用[J]. 马登磊,张如意,李林.  中国比较医学杂志. 2018(01)
[2]P301S突变tau转基因动物模型及其应用[J]. 马登磊,张兰.  实验动物与比较医学. 2017(06)
[3]马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化[J]. 杨翠翠,李林,张丽,李雅莉,张兰.  首都医科大学学报. 2016(06)
[4]Tau蛋白过度磷酸化机制及其在阿尔茨海默病神经元变性中的作用[J]. 王建枝,田青.  生物化学与生物物理进展. 2012(08)
[5]连锁于17号染色体伴帕金森病的额颞叶痴呆[J]. 米东华,张本恕,马爱军.  国际遗传学杂志. 2007 (01)



本文编号：2932753