猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其免疫学特性研究

发布时间：2017-04-08 18:18

  本文关键词：猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其免疫学特性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究利用基因工程技术构建猪带绦虫重组Bacillus Calmette-Guérin(BCG)-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况;然后将重组BCG-TSOL18疫苗免疫昆明小鼠,动态观察免疫小鼠血清特异性Ig G和Ig G2a的变化规律,脾淋巴细胞增殖水平及脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4的水平,为该疫苗的进一步研究奠定基础。方法:将本室制备保存的重组质粒p GEX-TSOL18经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后获得TSOL18目的基因,再将其定向克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体p MV261中,构建p MV261-TSOL18重组质粒,采用电穿孔法将该重组质粒转入BCG中,构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,并进行PCR鉴定;将重组BCG-TSOL18疫苗经45℃热诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定和Western blot分析重组TSOL18蛋白的表达情况。然后将80只昆明小鼠随机分成4组:(1)腹腔注射组,接种5×106克隆形成单位(CFU)重组BCG-TSOL18疫苗100μl;(2)口服灌胃组,接种4×108 CFU重组BCG-TSOL18疫苗100μl;(3)和(4)分别为BCG和PBS对照组。于疫苗免疫后0、2、4、6和8w,收集血清和脾淋巴细胞,采用ELISA法检测血清特异性Ig G和Ig G2a水平及脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4水平;采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平。结果:重组质粒p GEX-TSOL18经双酶切鉴定成功获得393bp TSOL18目的基因;重组质粒p MV261-TSOL18经双酶切、PCR和测序证实构建成功;重组BCG-TSOL18疫苗经PCR证实构建成功;SDS-PAGE证实重组质粒p MV261-TSOL18在BCG中经热诱导后能够表达相对分子质量(Mr)约为14.7k Da的重组TSOL18目的蛋白,Western blot分析示该重组蛋白有特异的抗原性。动态观察表明:疫苗腹腔注射组和口服灌胃组小鼠血清特异性Ig G和Ig G2a水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w达较高水平;脾淋巴细胞增殖水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w达较高水平;脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4水平均在免疫后2~8w和4~6w升高,均在免疫后 6w和4w达较高水平。结论:1.成功构建了猪带绦虫重组质粒p MV261-TSOL18。2.成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗。3.猪带绦虫TSOL18基因能在BCG中诱导表达,且表达的重组TSOL18蛋白具有特异的抗原性。4.猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗可诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。
【关键词】：猪带绦虫 重组BCG-TSOL18疫苗 构建 表达 免疫学特性
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 中英缩略词对照表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 第一章 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达研究14-35
• 材料14-20
• 实验方法20-28
• 结果28-32
• 讨论32-35
• 第二章 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗免疫学特性研究35-51
• 材料与方法35-40
• 结果40-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-56
• 综述56-68
• 参考文献64-68
• 致谢68-69
• 作者简介69

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本文编号：293409