嵌合型重组HCV cDNA的构建及体外转录RNA的感染特性研究

发布时间：2020-12-25 10:30

　　丙型肝炎病毒(HCV)是有囊膜的单股正链RNA病毒,属黄病毒科肝炎病毒属。基因组全长约9.6kb,仅含有一个开放读码框(ORF),ORF两侧具有与复制和翻译相关的非编码区(UTR)。HCV是丙型肝炎的病原体,急性感染后约75%发展为慢性肝炎,其中约20%结局为肝硬化或肝功能衰竭,并有可能进一步发展为肝细胞肝癌。目前全世界有1.7亿HCV感染者,HCV感染已经成为全球性的严重社会公共卫生问题之一。 迄今尚无特异有效的防治HCV感染的方法,疫苗研究也未取得明显进展。其原因除了HCV本身型别多样,且高度变异以外,缺乏稳定可靠的细胞培养系统和小动物实验模型,也极大地制约着HCV及其致病机理和防治研究的深入开展。利用传统方法建立HCV细胞培养模型一直未获得突破性进展,而体外转录制备感染性RNA(感染性转录体)技术的建 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

各目的基因片段的PCRF1910AmPlifieationofB3US、B3UL、BSUI、BSUll、(A)

载体自身各有l个scal位点，而且在酶切鉴定pBSU一TEasy重组子时，已知BSU为反向插入T载体中，使用Seal单酶切，将得到1186bp与429lbp的片段，酶切产物经电泳后可见与预期大小相符的条带(图12)。连接后的片段经再次测序，读框正确，无移码突变。图12重组质粒pBSU一AHE一TEasy的酶切鉴定结果F1912RestrietionendonueleasesdigestionofreeombinantPlasmidPBSU一AHE一TEasyl:PBSU一AHE一TEasy/Xhol+Xbal;2:入DNA/EeoRI+HindlllMarker3:DL2000Marker:4:PBSU一AHE一TEasy/Seal52

致p3oll上417obp处Hindlll位点消失，pHFLurtl终长度16163bp，并且在使用Xbal+Seal双酶切，BamHI与Hindlll分别单酶切时，与p30llutrl酶切结果截然不同(图13)。图13重组质粒pHFLutrl与p30llutrl的酶切鉴定结果比较F1913RestrietionendonueleasesdigestionofPlasmidsPHFLutrlandP301lutrlI:P301lutrl/Xbal+Seal(3.4+13.7kb):2:P301]utrl/BamHI(5.2+5.7+6.2kb)3:P30llutrl/HindDI(1.2+1.8+2.1+4+skb);4:DL2000marker(rfomuPtobottom:2000，1000，750，500，250，10ObP)5:入DNA/Hind111Marker(rfomuPtobottom:23136，9416，6557

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2937477