腮腺炎病毒F蛋白七肽重复序列的结构生物学研究

发布时间：2020-12-27 07:11

　　腮腺炎病毒（MuV）同其他囊膜病毒相似，在融合蛋白（F）中具有两个七肽重复序列结构域（HR）。有关其他囊膜病毒F蛋白的研究表明，HR区在F蛋白介导的病毒侵染中起着至关重要的作用，在结合蛋白或结合亚基的协助作用下，两段HR结构域的构像发生变化形成热稳定的富含α螺旋的发夹异源三聚体结构，并由此得到一个共同的融合机制。但目前并不清楚MuV是否有类似于其他囊膜病毒的侵染机制。 本研究构建了HR区（HR1、HR2和2-Helix）的重组载体，并在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达了HR1、HR2和2-Helix。GST融合的HR1、HR2和2-Helix单体蛋白都以可溶形式表达，利用亲和层析及凝胶过滤层析纯化获得了高纯度的目的蛋白。经pull-down实验，初步证实HR1和HR2之间存在相互作用，HR1和HR2的混合物在凝胶过滤层析中以聚体形式存在。HR1／HR2和2-Helix的化学交联实验表明，等摩尔的HR1和HR2可形成异源三聚体，其中2-Helix蛋白随着交联剂浓度的增加，呈现明显的单体和聚体的浓度梯度；HR1／HR2蛋白由于浓度较低虽未见清晰的单体和聚体的浓度梯度，但仍可看到明显的异... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图上分别为B、c所对应的一级结构示意图.在由激活前向激活后状态的转变过

这时的N一pePtide被暴露出来，使得合成的c一pePtide可以与之结合，假设这种结不可逆的，便可使即41失去融合活性。许多试验结果都支持发卡前体中间态的比如，c一pePtide必须在有宿主细胞存在的情况下才能发挥作用。若病毒先与C一pe预作用，而后在加入靶细胞膜前除去C一pePtide，病毒的感染就不能被抑制190】，并着抗原表位的c一pePtide只能对有cD4存在情况下的gP41进行免疫沉淀。这说体介导的构象变化对N一pePtide区的暴露是必须的[90〕。c一pePtide的抑制动力学显个短暂的中间态可能维持数分钟[2’，24]。受体结合引发的构象变化在1分钟内就开1391，而c一pePtide在受体结合后巧min加入仍有抑制活性[92]。流感病毒HA可能在一个瞬时中间态[5，8]，但还需进一步验证。HA由自然态到融合态的结构变化可连续发生的，首先是弹簧负载机制的发生，使融合肤插入到宿主细胞膜中，这一gP41的发卡前体形成相似，接着coiled一coll三聚体的底部回转使整个分子对折，将两层膜拉近，这恰与gP41的发卡三聚体相似。

腮腺炎病毒F蛋白七肤重复序列的结构生物学研究能障阻断它向最稳定构象的转变。当蛋白暴露于融合激活条件下时，它就克服自然态的动力学能障并开始融合所必需的构象变化。对流感病毒来讲，这时其HAI结构域丧失三聚体间的接触并从紧凑的糖蛋白结构中发生轻微分离，融合肤从其包埋位置释放出来并以类似喷泉喷出或弹簧弹出的方式推动到中心三聚体的氨基端，一旦暴露，融合肤便与靶细胞膜发生相互作用。对Hlv-1来讲，当gp120与cD4结合后引起gP120构象的变化，使它能与辅助受体结合，随后gp120和gP41的进一步构象变化大大减弱它们间的相互作用，形成gP41短暂的发卡前体中间态，释放出包埋着的融合肤与宿主细胞膜相互作用并暴露出N一pePtide区(也可能暴露C一pePtide区)，但由于缺少即120/即41融合前的晶体结构，还不知道HIV-1发卡前体中间态的形成是否同流感病毒一样也利用喷泉机制，或融合肤在融合前后的位置未变，只是少了gp120的覆盖。


本文编号：2941316